会计学应用范围：1.病毒及亚细胞组份分离2.蛋白梯度分离3.脂蛋白分离4.RNA梯度沉淀5.质粒DNA提纯认识离心机及学习离心机的使用方法学习细胞器的分离及纯化的一般原理和方法实验原理相对离心力（RCF）由于转头有不同的制造商制造，半径不同，故用相对离心力来表示离心力的大小。RCF(×g)=Fc/F重力=mG/mg=r·ω2/g=1.119×10-5·N2·r=11.2r(N/1000)2也有：根据这个公式，相对离心力（RCF）和每分钟转数（N）之间便可以互换，这种互换关系是很有实用价值的。实验用品台式高、超速离心机0.6-10万rpm离心机一般由离心机主机，转头，离心管三部分组成。一般制备离心高速冰冻离心机从低速到高速逐级沉淀分离，使较大的颗粒先在较低转速中沉淀，再用较高转速将原先悬浮在上清液中的较小颗粒分离沉淀下来，从而使各种亚细胞组分得以分离。差速离心法主要用于分离细胞器和病毒。其优点是：操作简单，离心后用倾倒法即可将上清夜与沉淀分开，并可使用容量较大的角式转子。缺点是：①分离效果差，不能一次得到纯颗粒；②壁效应严重，特别是当颗粒很大或浓度很高时，在离心管一侧会出现沉淀；③颗粒被挤压，离心力过大、离心时间过长会使颗粒变形、聚集而失活。Lowspeed密度梯度离心法：用具有梯度的介质来替换离心管中密度均一的介质，使介质分为不同的层次，浓度低的在上层，高的在底层。细胞匀浆加在最上层，随后离心。这样，不同大小、形态、密度的颗粒，就会以不同的速度向下移动，击中到不同的区域，可以分别收集。该法的优点是：①分离效果好，可一次获得较纯颗粒；②适应范围广，既能分离具有沉淀系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度的颗粒；③颗粒不会积压变形，能保持颗粒活性，并防止已形成的区带由于对流而引起混合。缺点：①离心时间较长；②需要制备梯度；③操作严格，不宜掌握。将离心机转数换算为相对离心力时，首先，在r标尺上取已知的半径和在N标尺上取已知的离心机转数。然后，将这两点间划一条直线，在图中间RCF标尺上的交叉点即为相应的相对离心力数值。注意，若已知的转数值处于N标尺的右边，则应读取RCF标尺右边的数值；同样，转数值处于N标尺左边，则读取RCF标尺左边的数值。应急处理：如果离心时发现离心管破裂，必须先停止实验，将破裂管密封放入生物垃圾桶，再用75%酒精进行擦拭消毒，如必要需用移动紫外灯照射30～60分钟后才能开始实验。注意事项：a）离心机应始终处于水平位置，与外接电源电压匹配，并要求有良好的接地线。b）开机前应检查机腔有无异物掉入。注意事项：c）样品应预先平衡，使用离心机微量离心时离心套管与样品应同时平衡。d）挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏以免侵蚀机腔或造成事故。e）每次操作完毕，应做好使用情况记录，应定期对机器各项性能进行检修。f）离心过程中若发现异常现象，应立即关闭电源，报请有关技术人员检修。玉米黄化幼苗线粒体的分离（整个过程保持在0-4℃）1.将玉米黄化幼苗剪下，称重每小组约5g，在冰箱中放置1小时2.将幼苗剪碎直接倒入研钵中以1:3(重量体积比g:ml)比例加入离心匀浆介质，快速研磨，注意先加入少许介质液，研碎后将余液加入3.用双层尼龙网过滤，除去残渣。4.取滤液在低温高速离心机伤2300rpm离心10min弃沉淀5.取上清液在低温高速离心机上9950rpm离心10min弃上清液6.所留沉淀用匀浆介质液洗涤，以9950rpm离心10min弃上清7.将所得沉淀悬浮于0.5M，ph=7.2甘露醇中，至于冰箱备用。8.将制备的线粒体悬液滴于干净的载玻片上用1%詹纳斯绿B的0.25M蔗糖液（ph=7.4）染色20min9.加干净的盖玻片。镜检最好用相差显微镜，所有的线粒体都被染成蓝绿色颗粒，检验制备的线粒体的纯度菠菜叶叶绿体的分离（整个过程保持0℃）1取去叶脉的的新鲜菠菜叶5g于研钵中，加入0.35mol/LNaCl溶液15ml研磨。注意开始研磨时也是先加入少许介质，研磨后加入余液2绿色的匀浆液用尼龙网过滤，滤液分别转入两支干净的离心管中，以1000rpm离心4min，除去沉淀。3上清液在高速低温离心机上以3000rpm离心5min，所得的沉淀是叶绿体4用0.35mol/LNaCl溶液稀释，放置于冰箱中保存。在干净的载玻片上滴加叶绿体悬液，加盖玻片在显微镜下光差叶绿体的形态