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体外受精与核移植动物为什么要进行动物人工繁殖?所有的这一切,都必须依赖于动物细胞工程,尤其是胚胎工程和核移植技术。精、卵胚胎工程:是指对动物早期胚胎或配子进行的工程技术操作,获得所需要的成体动物的技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割与融合、胚胎/精子/卵子冷冻保存、胚胎性别控制、胚胎细胞核移植、基因导入等。胚前期:受精—第2周末受精、卵裂、形成胚泡。胚期:第3周—第8周末三胚层的形成和分化,各主要器官原基的建立胎期:第9周—出生体外受精动物(试管动物):将供体的精子和卵子在体外受精、体外培养胚胎发育到一定阶段,通过胚胎移植移入受体完成发育出生的动物。体外受精:哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。促进家畜改良的速度由于提高了繁殖能力,可以使一头母畜在一个性周期内繁殖更多的仔畜,从而在短期内使优良种畜得到大量繁殖,促进了家畜改良的速度。保存遗传资源对优良母畜或稀有哺乳动物有计划地保存胚胎,建立起“胚胎库”。异地移植只需运输冷冻胚胎即可,而且可以有计划地进行胚胎采集和移植,优良胚胎的利用率就会大大提高。①精子采集与体外获能、卵子采集与成熟培养;②体外受精;③重组胚激活与体外培养;④胚胎移植;⑤体内发育、出生。采集精子并选择有活力的精子精子的体外获能:是指精子获得穿卵子透明带能力的过程。采用添加诱导精子获能物质(钙离子、血清蛋白、肝素等)的特定培养液来完成精子体外获能。精子的结构(一)成熟卵细胞的收集超数排卵:利用促性腺激素处理,使得卵巢中有更多的卵泡发育,更多的卵被排出,利用手术取出卵母细胞。目的是最大限度地利用母畜的生殖能力(牛超数排出5-10个卵母细胞)卵细胞的收集:在腹腔镜下用吸管吸出卵细胞。卵子的结构卵子的发生(二)卵母细胞的收集、选择与成熟培养活体卵巢采集;屠宰后家畜的卵巢中采集。卵母细胞的选择:分A(三层以上卵丘细胞,卵母细胞质均匀)B(卵丘细胞低于三层,卵母细胞质均匀)、C(裸露卵母细胞)和D(死亡或退化卵母细胞)四个等级,一般选择A级和B级卵母细胞。卵母细胞的体外成熟培养成熟的标志:生发泡破裂;染色体凝集;极体排出;透明带软化;卵丘细胞扩展。精卵放在一起培养精子和卵子经过受精作用形成受精卵,受精卵经过卵裂、形成囊胚,囊胚进一步发育进入原肠胚阶段,形成不同胚层,再产生器官原基,进一步产生个体。体外受精受精卵需在体外培养发育至桑椹期或囊胚期才能进行移植。移植的较佳时期是发育至8-16细胞期的胚胎。卵裂:合子发生分裂形成若干小细胞。卵裂细胞不生长而连续分裂。主要是卵裂球的有丝分裂器与表层胞质变化的过程。桑椹胚:卵裂数次后,出现实心细胞团,形似桑椹得名。受精卵在进行卵裂的同时,逐渐向子宫腔移动。受精后72小时,桑椹胚进入子宫腔。卵巢胚泡:哺乳动物的胚胎处于16细胞期的桑椹期时,胚胎是球型细胞团,细胞之间形成充满液体的腔隙,然后它们联合形成一个大腔位于胚胎的一端,即为胚泡结构。囊胚:桑椹胚随着卵裂出现充满液体的囊胚腔,围绕囊胚腔的细胞组成囊胚层。原肠胚:囊胚继续发育、分化,形成双胚层或三胚层的原肠胚。外层为外胚层、迁到里面的称为内胚层和中胚层。哺乳动物胚泡着床胚泡5-8周人胚外形演变29概念:是指将发育到一定阶段的胚胎移植到与供体同时发情排卵、但未经配种的“受体”母畜输卵管或子宫的技术。供体:提供胚胎的个体。受体:接受胚胎的个体。“借劣质动物之腹怀优秀个体之胎”胚胎的来源:◆体外受精、培养的胚胎◆经超排、输精(体内人工受精)后,回收的早期胚胎移植的方法:有手术法(小型家畜)和非手术法(大型家畜)我国从20世纪70年代开始胚胎移植的研究,先后在山羊(1974年)、牛(1978年)、家兔(1979年)上获得成功。胚胎分割:借助显微操作技术或徒手操作方法,切割早期胚胎成2、4等多等份,再移植给受体母畜,从而制造同卵多仔后代的技术。胚胎分割是扩大胚胎利用率的一种有效途径。胚胎分割技术不仅可以使胚胎移植的胚胎数目成倍增加,而且可以产生遗传性状相同的后代,因此是一种广义上的克隆技术。33胚胎融合:又叫胚胎嵌合,是将两枚或两枚以上的胚胎(同种或异种动物)的部分或全部细胞融合在一起,使之发育成一个胚胎,然后移植到受体母畜体内让其继续发育形成一种嵌合体后代的技术。将同一种类的黑鼠和白鼠胚胎融合,可以获得多个黑白相间的花鼠。将不同种的绵羊和山羊的胚胎融合,可得到拥有绵羊和山羊双重特性的新品种——“绵山羊”。大鼠-小鼠、绵羊-山羊、马-斑马、黄牛-水牛等属间嵌合体动物。异种嵌合体:山羊-绵羊囊胚注射法:把某些种类细胞(卵裂球、内细胞团细胞、胚胎干细胞,甚至是已经分化的细胞)注射入囊胚的囊胚腔中。为动物胚胎发育及遗传控制等研究