醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白目的掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。二、原理蛋白质是两性电解质。当PH>PI时，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动；当PH<PI时，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动。血清中含有数种蛋白质，在同一PH值时，因所带电荷不同，而在电场中的移动速度也不相同，故可用电泳法将其分离。本试验以牛血清为材料，醋酸纤维薄膜为支持物，通过点样、电泳、染色、脱色从而得到血清中蛋白质的分离图谱，再进行观察和定量分析。血清中含白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等。其等电点低于pH7.0，在缓冲液中（pH8.6）中，电离成负离子，在电场中向阳极移动。用醋酸纤维薄膜作蛋白电泳有简便，快速，分离清晰，容易定量等优点。三、实验仪器1、牛血清2、醋酸纤维薄膜3、镊子4、电泳仪5、电泳槽6、盖玻片四、实验试剂1、巴比妥—巴比妥钠缓冲液（离子强度，PH8.6）：称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g，溶于蒸馏水并稀释至1000ml。用pH计较正后使用。2、染色液：氨基黑10B0.5g,甲醇50ml，冰乙酸10ml，蒸馏水40ml混匀即可。3、漂洗液：95%乙醇45ml，冰乙酸5ml和蒸馏水50ml混匀即可。五、试验步骤1、准备：用镊子取薄膜一条，浸入缓冲液中，完全浸透后（大约3-5分钟），用镊子取出，将无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，将滤纸对折，吸取多余的缓冲液（注意不要吸的太干）。2、点样：取盖玻片一块，用玻璃棒将血清均匀的涂在盖玻片的一端面上，垂直地在薄膜一端1/3处点样(无光泽面)。3、电泳：将薄膜平贴于放在电泳槽上并已浸透缓冲液的滤纸上，无光泽面要向下放置，点样端放在阴极，进行电泳。电泳条件：电压90-110V，电流0.4-0.6mA,通电60分钟。4、染色：电泳完毕，将薄膜浸入染色液（回收）中10分钟，进行染色。5、漂洗：染色完毕，将薄膜取出，放入漂洗液中漂洗至背景无色，再浸入蒸馏水中。(少量多漂)6、图谱观察：观察图谱，将各种血清蛋白质按实际比例大小绘于实验报告纸上。六、实验结果由下图可以得出结论：至少含有三种血清蛋白质。七、实验分析1、镊子要回收。2、醋酸纤维薄膜在光下面能明显区分有光泽面和无光泽面。3、电泳槽中间为正极，两端为负极。4、染色液请用完后回收到原来的试剂瓶中。5、漂洗薄膜时，请做到“少量多漂”，即用少量的漂洗液去漂洗薄膜，多漂几次，这样既不浪费漂洗液，还达到了漂洗的效果。6、点样时动作要轻并且稳。