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一.实验原理利用显微镜并借助血细胞计数板,计算单位体积的液体中所含细胞或微小生物的数量。血细胞计数板盖玻片三.实验步骤1.取血细胞计数板,检查计数板是否清洁,如有污垢,应先洗涤干净。然后将计数板放于低倍镜下,熟悉计数室的构造。然后加盖玻片盖住两边的小槽。2.充液:用小滴管将一小滴稀释200倍的兔血滴在盖玻片边缘的玻片上,使稀释血液借毛细管现象自动渗入计数室中。三.实验步骤3.计数:充液后静止1-2分钟,待红细胞下沉后,方可进行计数。计数中央大方格内四角及中央共5个中方格内的80个小方格中所有细胞数。计数时为防止重复和遗漏,应按一定的顺序,先自左向右数到最后一格,下一行格子则自右向左,再下一行又自左向右,即呈S形计数。计数分布在刻线上的红细胞时,依照“计上不计下,计左不计右”的原则,判断标准为是否接触三条边线的中间线。四.注意事项:防止液体滴入过多,否则溢出并流入两侧槽内,会使盖玻片浮起,体积改变,会影响计数结果。2.先用低倍镜找到血球计数器的计数区,调节光源亮度以及孔径光阑大小得到清晰的图像。五.实验结果和作业:计算出每立方厘米(每毫升)的兔血中所含红细胞的数量。六.思考题:1.比较鸟类(鸭)与哺乳类动物(兔)血红细胞大小及形态上的差异。十字板分划板网格板Amitoticfertilizedeggfromaseaurchin(海胆)镜台测微尺3.移动镜台测微尺,同时转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺平行靠近,并将两尺的“0”点刻度线或某刻度线对齐,然后从左向右查看两尺刻度线另一重合处,记录重合线间目镜测微尺与镜台测微尺的格数。a.将绿豆大小血滴滴于清洁玻片上。b.另取边缘平滑的玻片作为推片:推片一端放在血滴的前方,逐渐后移,接触血滴并使血滴沿推片边缘均匀展开,然后将推片与玻片保持30-45度角,轻轻用力,均匀而迅速地将推片沿玻片表面向前推至玻片另一端,形成头体尾明显的舌形血膜。立即将玻片摇动,使其快速干燥,忌热力干燥。三、实验步骤:鸭血细胞的观察与测量2.血涂片染色与观察:将已经制备好的鸭血涂片放在染色盘架上,滴几滴瑞氏染液(伊红美蓝混合染料溶于甲醇中制得)于玻片上盖满涂片部分,静置染色1分钟,滴加等量1/15mol/L磷酸缓冲液,轻轻摇动混匀,再静置染色5-10分钟,最后用清水缓缓冲洗(从玻片的背面冲洗)1分钟,倾斜放置,凉干后进行观察测量。3.鸭血红细胞大小的测量:移去镜台测微尺,换鸭血涂片。先用低倍镜观察全片,了解涂片染色、细胞分布情况,选择细胞分布均匀的部分(常在血膜体尾交界部),转高倍物镜按一定顺序检查。涂布均匀的鸭血红细胞四.注意事项1.不同物镜下目镜测微尺代表的大小不同。五.实验结果和作业:1.分别计算不同物镜放大倍数(10x,20x,40x)下目镜测微尺的单位。2.用目镜测微尺和镜台测微尺测量一下鸭血红细胞的长轴和短轴,分别测量10个鸭血红细胞,求其平均值(多少微米?)。1.注意保护好血球计数器和镜台测微尺,实验结束时每人应交回其中一件用品。2.今天不使用油镜。3.实验结束请将所使用的血球计数器,镜台测微尺,载玻片,滴管,离心管及其他物品清洗干净并归还原位。清除自己实验过程中所产生的垃圾,等老师检查签字后再离开。4.请班长安排好值日生。