1什么(shénme)是干扰素1.1天然(tiānrán)干扰素的分类提高单核巨噬细胞、树突状细胞的抗原提呈能力增强Tc细胞和NK细胞的杀伤活性抑制TH2细胞形成，下调体液(tǐyè)免疫应答趋化作用抗病毒和抗肿瘤作用（次要）2.根据动物来源确定分类人干扰素（HuIFN），小鼠干扰素（MuIFN）。1.2重组(zhònɡzǔ)干扰素的临床应用2基因工程大肠杆菌(dàchánɡɡǎnjūn)发酵生产工艺干扰素生产工艺路线(lùxiàn)目的(mùdì)基因的分离一、目的基因(jīyīn)的分离与扩增二、构建(ɡòujiàn)重组质粒三、重组体引入宿主(sùzhǔ)细胞四、受体菌的筛选(shāixuǎn)五、分析(fēnxī)保存干扰素的发酵(fājiào)工艺过程1．菌种培养取－70℃下保存的甘油管菌种（工作种子批），于室温下融化。然后，接入摇瓶，培养温度30℃，pH7.0，250r/min活化培养18±2小时(xiǎoshí)后，进行吸光值测定和发酵液杂菌检查。2．种子罐培养将已活化的菌种接入装有30L培养基的种子罐中，接种量10%，培养温度30℃，pH7.0，级联调节通气量和搅拌转速，控制溶解氧为30%，培养3～4小时(xiǎoshí)，转入发酵罐中，同时取样发酵液进行显微镜检查和LB培养基划线检查，控制杂菌3.发酵罐培养将种子液通入300L培养基的发酵罐中，接种量10%，培养温度30℃，pH7.0。级联调节通气量和搅拌转速，控制溶解氧30%，培养4小时。然后控制培养温度20℃，pH6.0，溶解氧60%，继续培养5～6.5小时。同时进行发酵液杂菌检查，当OD值达9.0±1.0后，用5℃冷却水快速降温至15℃以下，以减缓细胞衰老(shuāilǎo)。或者将发酵液转入收集罐中，加入冰块使温度迅速降至10℃以下。4.菌体收集将已降温的发酵液转入连续流离心机，16000r/min离心收集。进行干扰素含量、菌体蛋白含量、菌体干燥失重、质粒结构一致性、质粒稳定性等项目的检测。菌体于－20℃冰柜中保存时，不得超过12个月。每保存3个月，检查一次活性。3.干扰素的分离纯化(chúnhuà)工艺过程3.1干扰素分离工艺(gōngyì)过程(1)菌体裂解(lièjiě)(2)预处理-沉淀(chéndiàn)(3)离心(líxīn)（4）初级(chūjí)分离3.2、干扰素纯化工艺(gōngyì)过程(1)溶解(róngjiě)粗干扰素(2)沉淀(chéndiàn)与疏水层析等电点沉淀（2）：磷酸调节pH4.5，调节电导(diàndǎo)值40ms/cm，2℃～10℃，静置过夜超滤：1000ku超滤膜过滤，除去大蛋白。透析除盐：调整溶液pH8.0，电导(diàndǎo)值，10ku超滤膜，0.005M缓冲液。(3)无菌过滤(guòlǜ)分装(4)检测(jiǎncè)项目半成品检定(jiǎndìng)（5）相对分子量测定还原型SDS-PAGE，加样量不地域微克，同时用已知相对分子量的蛋白标准系列做对照，以迁移率为横坐标，相对分子量的对数为纵坐标作图，计算相对分子量。与理论值比较，误差不得高于10%。（6）残余外源性DNA含量测定用放射性核素或生物素探针法测定，每剂量中残余外源性DNA应低于100pg。（7）残余血清IgG含量测定在应用抗体亲和层析法作为(zuòwéi)纯化方法时必须进行此项检定。（8）残余抗生素活性测定半成品中不应有抗生素活性存在。（9）紫外光谱扫描检查半成品的光谱吸收值，最大吸收值应在280±2纳米。（10）肽图测定用CNBr裂解法，测定结果应符合干扰素的结构，且批与批之间应一致(yīzhì)。（11）等电点测定等电聚焦电泳。（12）除菌半成品应做干扰素效价测定、无菌试验和热源质试验。成品(chéngpǐn)检定（5）热原质试验同半成品检定。（6）干扰素效价测定同半成品检定，效价不应低于标示量。（7）安全试验取体重为350-400克豚鼠3只，每只腹侧皮下注射(píxiàzhùshè)量为成人每千克体重临床使用最大量的3倍，观察7天，若豚鼠局部无红肿、坏死、总体重不下降，说明成品合格。取体重18-20克小鼠5只，每只尾静脉注射剂量按人每千克体重临床使用最大量的3倍，观察7天，若动物全部存活，说明成品合格。4国内基因工程药物产业(chǎnyè)发展状况存在的问题：（1）同种产品生产厂家过多，造成市场恶性竞争，严重影响产业的健康发展。（2）融资渠道(qúdào)单一、产业发展资金不足。（3）医药市场竞争无序，行业不正之风严重。（4）企业管理相对滞后，技术兼经营型人才匮乏。谢谢(xièxie)！感谢您的观看(guānkàn)！内容(nèiróng)总结