PAGEPAGE16【专项冲击波】2013高考生物讲练测系列专题15基因工程克隆技术（教师版）考点打破考点一基因工程与基因工程有关的几种酶名称作用参与生物过程相反点DNA连接酶连接两个DNA片段基因工程化学本质均为蛋白质，合成场所均为核糖体限制性核酸内切酶切割某种特定的脱氧核苷酸序列DNA聚合酶在脱氧核苷酸链上添单个脱氧核苷酸DNA复制RNA聚合酶在核糖核苷酸链上添加单个核糖核苷酸转录解旋酶使碱基间氢键断裂，构成脱氧核苷酸单链DNA复制及转录逆转录酶以RNA为模板合成DNA逆转录、基因工程例1、（2012上海56）已知在质粒pZHZl中，限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0．8kb，限制酶H切割位点距限制酶F切割位点O．5kb。若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样品，据表4所列酶切结果判断目的基因的大小为kb；并将目的基因内部的限制酶G和H切割位点标注在图19中。考点二基因工程的基本操作程序程序阐明目的基因的获取①从自然界中已有的物种中分离出来；②用人工的方法合成；③从基因文库中获得；④经过PCR技术获得基因表达载体的构建要点:同种限制酶切割目的基因与质粒；双酶切；运载体的要求；基因表达载体的组成将目的基因导入受体细胞①受体细胞品种：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞；②导入方法:显微注射法、农杆菌转化法、Ca2+处理细胞使细胞壁的通透性增大等目的基因的检测与鉴定检测对象：①检测转基因生物的染色体DNA上能否插入了目的基因；②检测目的基因能否转录出了mRNA；③检测目的基因能否翻译成了蛋白质。检测方法：分子检测法——①和②都是核酸分子杂交技术，③是抗原—抗体杂交法；外形检测法——可根据目标性状的有无来判断目的基因能否表达例2、（2012江苏32）图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI4种限制性核酸内切酶，它们辨认的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答以下成绩(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由连接。(2)若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，产生的末端是末端，其产物长度为。(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对交换，那么基因D就渐变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaI完全切割，产物中共有种不同长度的DNA片段。(4)若将图2中质粒和目的基因D经过同种限制酶处理后进行连接，构成重组质粒，那么应选用的限制酶是。在导入重组质粒后，为了挑选出含重组质粒的大肠杆菌，普通需求用添加的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的缘由是。考点三细胞工程1、植物组织培养、植物体细胞杂交、细胞核移植的比较：植物组织培养植物体细胞杂交细胞核移植原理植物细胞的全能性细胞膜的流动性、植物细胞的全能性动物细胞核的全能性方法离体的植物器官、组织或细胞→愈伤组织→根、芽→植物体去掉细胞壁→勾引原生质体融合→组织培养核移植→胚胎移植优点快速繁殖、培育无病毒植株等克服远缘杂交不亲和的妨碍，培育出作物新品种繁殖优秀品种，用于保存濒危物种，有选择地繁殖某性别的动物缺点技术要求高、培养条件严峻技术复杂，难度大；需植物组织培养等技术支持导致生物品系减少，个体保存能力降落举例试管苗的培育、培养转基因植物培育“番茄—马铃薯”杂种植株“多利”羊等克隆动物的培育植物体的器官、组织和细胞包括花药外植体脱分化（1）离体（2）灭菌、消毒（3）MS培养基（大量元素、微量元素、有机物等）（4）培养条件（适宜温度与ph遮光等）愈伤组织再分化幼苗或胚状体植物体细胞培养（1）微型繁殖（2）人工种子（3）作物脱毒（4）单倍体育种（5）突变体的利用（6）转基因及体细胞杂交、杂种作用培育（7）细胞产物的工厂化分化培养基适宜条件温度ph光照2、植物组织培养流程图3、动物细胞培养流程图动物组织块剪碎胰蛋白酶或胶原蛋白酶分散的细胞细胞悬浮液原代培养传代培养应用培养液合成培养基：血浆、血清等营养物质、抗生素条件无毒无菌、适宜温度、ph、氧气、二氧化碳①生产生物制品：干扰素、单克隆抗体②基因工程中受体细胞③检测有毒物质④用于生理、病理、药理研究例3、(2012·全国重点中学领航冲刺卷)如图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程；图2表示体外受精培育优秀奶牛的过程；图3表示番茄和马铃薯植物细胞融合和再生植株的过程，请据图回答上面