带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。与蛋白质分子相似，核酸分子也是两性解离分子，在pH8.0-8.3时，碱基几乎不解离，磷酸根全部解离，核酸分子带负电荷，向正极移动。分子在电场作用下的迁移速度，与电场强度和电泳分子所携带的净电荷数成正比。不同大小和构象的核酸分子的电荷密度大致相同，在自由泳动时各核酸分子的迁移率区别很小，难以分开。所以采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，发挥分子筛的功能，使得大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大差异，达到分离目的，在loadingbuffer的作用下，可观察电泳的进行情况。电泳操作步骤3、铺胶：将冷却致60℃的凝胶倒入准备好的胶床内，凝胶厚度3～5mm（注意在胶床的一个角落倒胶，同时不能间断，防止倒胶不均或产生气泡；一旦产生气泡，立即用枪头小心挑出）8、上样：用加样器吸取样品，轻轻的加入到凝胶的样品孔中。加样量一般小于20μlDye:与样品结合并使其显一定的颜色以指示样品在凝胶中所处的位置。DNA：EthidiumBromide,EB(溴乙啶)inlayedintoDNAdoublestrands.10ngArgent(银试剂)Ag+verysensitive0.5ng溴化乙锭（EB）是一种吖啶类染料，它在紫外灯照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳时，琼脂糖凝胶中的EB就插入DNA分子中形成荧光络合物，使DNA发射的荧光增强几十倍，电泳后就可直接紫外灯照射下检测琼脂糖中的DNA。电泳缓冲液的组成常用的电泳缓冲液的配制加样缓冲液加样缓冲液可以增大样品密度，以确保DNA均匀进入样品孔内，还可以使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利。溴酚蓝在琼脂糖凝胶中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍,溴酚蓝在琼脂糖凝胶中移动的速率约与长300bp的双链线性DNA相同,而二甲苯青FF在琼脂糖凝胶中移动的速率则与4kb双链线性DNA相同。电泳缓冲液特点：①TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。②TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。③TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。配制方法:50×TAEBuffer(pH8.5)配制方法：1.称量Tris242g，Na2EDTA·2H2O37.2g于1L烧杯中；2.向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌均匀；3.加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解；4.加去离子水定容至1L后，室温保存。10×TBEBuffer(pH8.3)配制方法：1.称量Tris108g，Na2EDTA·2H2O7.44g，硼酸55g于1L烧杯中；2.加入约800ml去离子水，搅拌均匀；3.加去离子水定容至1L，室温保存。loadingbuffer制胶和加样过程中要防治气泡的产生。紫外光对人眼有害，观察时加盖玻璃罩，观察时间不宜太长。EB具有强诱变性，可致癌。必须戴手套操作，严格注意防护。加样时，Tip头不宜插入样品孔太深，也不要穿破胶孔壁，否则样品渗漏或DNA带型不整齐。配胶和灌电泳槽需使用同一批缓冲液。因为pH或离子强度很小的差别也会在凝胶前部造成紊乱，影响DNA片段的泳动。梳板的选用一般每个制胶模具均配有多个齿型不同的梳板，梳齿宽厚，形成的点样容积较大，用于DNA片段回收实验等；相反，梳齿窄而薄，形成的点样容积就较小，用于PCR产物、酶切产物鉴定等。一般来说，上样量小时尽量选择薄的梳板制胶，此时电泳条带致密清晰，便于结果分析。凝胶一定要加热熔解完全，均匀，可以对着光亮的地方看看清澈不清澈；一般情况下，梳子越薄而长，条带越好看；上样量不宜过多，会造成条带的相互挤压；如果点样孔多余，将样点到中间，尽量避免边缘效应，中间电场比较均匀；做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致；加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电泳孔内；电泳开始时可以采用低电压使其跑出孔后，再调高电压。1、凝胶浓度选择根据样品DNA分子大小而定，所以电泳前应对DNA片段大小有粗略的估计2、要确保灌胶时没