金黄色葡萄球菌检验与计数金黄色葡萄球菌的生物学特性培养特性：易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。需氧或兼性厌氧。最适生长温度37°C，最适生长pH7.4。耐盐性强，在含10～15%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。在普通营养琼脂平板上培养18～24ｈ，可形成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。在血平板上可形成明显透明的溶血环。为β型溶血。可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成周围有白色沉淀环的菌落。大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红试验、VP试验多为阳性，不产生靛基质。触酶阳性。金黄色葡萄球菌的酶金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重要的致病物质。本菌引起的食物中毒是因为食品污染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大量肠毒素而导致的。近年报导表明，50%以上的金黄色葡萄球菌菌株在实验室条件下可产生肠毒素，并且1个菌株能产生两种或两种以上的肠毒素。肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肽链组成。分子量约为3000左右。易溶于水，难溶于有机溶剂。耐热，经100℃煮沸30min不被破坏，也不受胰蛋白酶的影响。食物中的肠毒素耐热性更强，一般烹调温度不能将其破坏。218~248℃的油中需30min才能被破坏。可引起急性胃肠炎。根据肠毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2）、D、E5个型。A型肠毒素引起的食物中毒较多，约占50%左右。其他依次为D、C、B和E型。也有A＋D、A＋B、A＋C、B＋C等。也有A＋D、A＋B、A＋C、B＋C等。将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。用接种环从有细菌生长的各管中，移取1环分别接种于Baird-Parker平板36℃±1℃培养45~48h。根据肠毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2）、D、E5个型。用接种环从有细菌生长的各管中，移取1环分别接种于Baird-Parker平板36℃±1℃培养45~48h。金黄色葡萄球菌ATCC25923218~248℃的油中需30min才能被破坏。黑色/灰色菌落带透明带另一种是菌细胞释放于培养基中，为游离凝固酶。金黄色葡萄球菌的菌落形态：呈金黄色，有时也呈白色，大而突起，圆形、不透明、表面光滑，周围有透明的β溶血环。易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重要的致病物质。玻片法只能检测结合凝固酶，而试管法可检测两种凝固酶。黑色/灰色菌落无透明带用于做血浆凝固酶菌落数金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌的检测程序增菌培养基样品的稀释增菌与分离培养分离培养基长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。分离培养基金黄色葡萄球菌的重要鉴定-血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mLBHI，36℃±1℃培养18h～48h，重复实验。结果报告影响血浆凝固酶试验的因素不能使用甘露醇氯化钠琼脂上的菌落做血浆凝固酶的实验，因所有高盐培养基都可以抑制A蛋白的产生，造成假阴性结果。不要用力振摇试管，以免凝块振碎。实验必需设阳性(标准金黄色葡萄球菌)、阴性(白色葡萄球菌)、空白(肉汤)对照。玻片法只能检测结合凝固酶，而试管法可检测两种凝固酶。因此，两种试验所得结果可完全不同。玻片法只用于筛选。金黄色葡萄球菌计数第一法BairdParker平板法第二法MPN法第三法PetrifilmTM测试片法大肠埃希氏菌ATCC25922或8739结果报告：MPN/g或MPN/mL易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。表皮葡萄球菌ATCC12228否则为无致病力的菌株。金黄色葡萄球菌可产生血浆凝固酶和耐热DNA酶。用接种环从有细菌生长的各管中，移取1环分别接种于Baird-Parker平板36℃±1℃培养45~48h。用人血浆出现凝固的时间短，约93.金黄色葡萄球菌的检测程序固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。计数范围要求：选择合计菌落数在20~200的平板，计数典型菌落。挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5mLBHI和营养琼脂小斜面，36℃±1℃培养18h～24h。革兰氏染色阳性