基因(gene)基因变异致病类型（三）、特点针对性强特异性高灵敏度高适用性强，诊断范围广二、基因诊断常用技术方法（一）、核酸分子杂交(molecularhybridization)技术探针是能够同某种待研究的核酸序列或蛋白多肽链特异结合的任何分子，经标记之后可用来检测目的DNA/RNA或蛋白质分子。实验流程：提取DNA→(限制酶切)→凝胶电泳→膜转移→杂交→放射自显影→分析建立在核酸杂交技术基础上的常用基因诊断方法1、限制性内切酶酶谱分析法2、DNA-RFLP分析法RFLP分析法3、ASO杂交法ASO杂交法（二）、聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)2、常用的PCR方法：常规PCR、巢式PCR、多重PCR、多种PCR、不对称PCR、反转录PCR、定量反转录PCR、mRNA差异显示PCR、原位PCR、实时PCR等等。3、在PCR技术基础上的常用基因诊断方法SSCP是指相同长度的单链DNA因其碱基序列不同，甚至单个碱基不同，都可能形成不同的空间构象，从而在中性聚丙烯酰胺凝胶电泳时泳动速率不同的现象。PCR-SSCP分析（三）、基因测序(genesequencing)（四）、基因芯片（genechip)基因芯片的应用（五）、DNA指纹(DNAfingerprint)简言之：DNA指纹或遗传指纹是指采用“小卫星”基因探针进行DNA分子杂交（Southern印迹，Southernblotting）所得的图谱。实验流程：提取DNA→限制酶切→凝胶电泳→膜转移→杂交→放射自显影→分析三、基因诊断的应用总结复习题（一）、基因治疗的概念早期是指用正常的基因整合入细胞基因组，以校正和置换致病基因的一种治疗方法。（二）、基因治疗的基本方法1、基因矫正(genecorrection)2、基因置换(genereplacement)3、基因增补(geneaugmentation)4、基因失活(geneinactivation)1、基因矫正(genecorrection)指将致病基因的异常碱基进行纠正，而正常部分予以保留。纳米钳AGCTGTGAAGTCGTGTCGACACTTCAGCAC2、基因置换(genereplacement)指用正常的基因通过体内基因同源重组，原位替换致病基因，使细胞内的DNA完全恢复正常状态。AGCTGTGCAAGTCGTGTCGACACGTTCAGCAC3、基因增补(geneaugmentation)将目的基因导入病变细胞或其他细胞，不去除异常基因，而是通过目的基因的非定点整合，使其表达产物弥补缺陷基因的功能或使原有基因表达增强。AGCTGTGCAAGTCGTGTCGACACGTTCAGCAC4、基因失活(geneinactivation)指将特定的序列导入细胞后，在转录或翻译水平阻断某些基因的异常表达，已达到治疗疾病的目的。几种常见的基因失活技术①反义(antisence)核酸技术反义RNA技术TCGACACATTCAGCACAGCTGTGTAAGTCGTG②核酶(ribozyme)技术③三链技术(triplexapproach)④干扰RNA(interferenceRNA,RNAi)技术RNAi技术的特点⑤肽核酸(peptidenucleicacid,PNA)技术⑥基因敲除(geneknock-out)技术（三）、基因治疗的其他方法2、基因疫苗的应用将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞内表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。二、基因治疗的基本程序常见基因载体的优缺点载体优点缺点逆转录病毒基因组小并且简单仅感染分裂细胞稳定整合于宿主基因组随机整合可能导致突变生物学特性清楚常常只有短暂表达可高效转入复制中的细胞病毒滴度低107pfu/ml对宿主无害可能会于有复制能力的病毒重组腺病毒相关病毒基因组小未知可特异整合于人染色体19q需腺病毒辅助复制以人细胞作为宿主携带外源基因能力有限无毒，无致病性难得到高滴度病毒腺病毒适用于原位使用，尤其是肺不与宿主基因整合在不分裂细胞中可进行高效率只有短暂表达的体内感染无特异性靶细胞病毒滴度高1010pfu/ml病毒蛋白可引起免疫反应和炎症反应生物学特性清楚插入外源基因能力有限脂质体无感染能力无特异性靶细胞理论上无DNA大小限制转染效率低毒性低仅有短暂表达，体内应用困难受体介导的转运无感染能力转染效率低特异性转染靶细胞体内应用困难理论上无DNA大小限制可能有免疫原性构建灵活只有短暂表达三、基因治疗的应用与展望(二)、展望本节重点提示基因治疗的概念、方法、基本程序复习题二、基因诊断常用技术方法2、