会计学1、酶分子(fēnzǐ)改造的方法实例：木糖异构酶的定点突变(tūbiàn)改造实例：木糖异构酶的定点(dìnꞬdiǎn)突变改造2、生物自然(zìrán)进化的局限性基因工程技术使得人类快速筛选工业菌种成为可能，在几天和数月内即可完成(wánchéng)；还可以让人类按照自己的意愿和需要改造菌种，甚至可以产生自然界中原本不存在的全新酶，以适应大工业生产的需要。3、酶的定向进化技术(jìshù)4、定向进化的原理(yuánlǐ)二、酶定向进化的应用(yìngyòng)酶定向进化的典型(diǎnxíng)例子β－内酰胺酶的活性提高(tígāo)了32,000倍；β－半乳糖苷酶的底物特异性提高(tígāo)了1000倍，且活性提高(tígāo)66倍；天冬氨酸转氨酶对β－支链氧代氨基酸活性提高(tígāo)105倍且对缬氨酸的催化效率提高(tígāo)2.1×106倍等。成功(chénggōng)的例子三、酶定向进化的基本(jīběn)过程1、定向进化的方法(fāngfǎ)无性(wúxìnꞬ)进化：易错PCR方法无性进化(jìnhuà)：易错PCR方法易错PCR方法(fāngfǎ)实例有性进化(jìnhuà)：DNA改组方法（1994，Stemmer)有性进化：DNA改组(gǎizǔ)方法有性(yǒuxìnꞬ)进化：体外随机重组法（1998，Arnold)有性进化(jìnhuà):交错延伸法（1997，Arnold)基因(jīyīn)家族的同源重组TheMolecularBreedingdirectedmolecularevolutionprocess对一组同源蛋白质的氨基酸序列(xùliè)进行比较，以一定的标准程序计算出各氨基酸序列(xùliè)的共有序列(xùliè)；人工合成同序基因后重组表达。MartinLehmann等（2000～2002）把这种方法应用在真菌植酸酶家族设计合成了同源植酸酶基因，并表达出具热稳定性的同源植酸酶。外显子改组(gǎizǔ)杂合(záhé)进化2.基因文库的构建(Ɡòujiàn)基因重组：体外通过DNA连接酶的作用，将基因与载体DNA连接在一起形成(xíngchéng)重组DNA的过程。重组方法：黏性末端连接平头末端连接修饰末端连接组装突变基因文库将重组DNA转入受体细胞或包装成为有感染活性的重组噬菌体的过程。组装方法：重组质粒载体---转化（原核和真核）重组噬菌体载体-包装3、基因突变(jīyīntūbiàn)库的筛选方法平板筛选(shāixuǎn)方法平板(píngbǎn)筛选方法平板筛选(shāixuǎn)方法荧光(yíngguāng)筛选方法2008年诺贝尔化学奖介绍(jièshào)2008年诺贝尔化学奖介绍(jièshào)绿色荧光(yíngguāng)蛋白的应用绿色(lǜsè)荧光蛋白的应用绿色(lǜsè)荧光蛋白的应用绿色荧光蛋白(dànbái)的应用绿色荧光蛋白(dànbái)的应用噬菌体表面(biǎomiàn)展示法噬菌体显示筛选(shāixuǎn)模式噬菌体显示(xiǎnshì)的几种类型M13噬菌体pIII和pVIII的显示(xiǎnshì)酵母细胞(xìbāo)表面展示法核糖体显示(xiǎnshì)技术RNA-蛋白质融合(rónghé)技术RNA-蛋白质的融合(rónghé)寡霉素与核苷酸的连接(liánjiē)Mycds-DNA的富集实例(shílì)：天冬氨酸转氨酶的热稳定性的定向进化高通量筛选方法(fāngfǎ)的建立生物信息学技术手段的建立天冬氨酸转氨酶热稳定性的改造天冬氨酸转氨酶热稳定性改造(gǎizào)天冬氨酸转氨酶的作用(zuòyòng)－－酶法制备L－苯丙氨酸的关键酶；肉桂酸酶法结构(jiégòu)分析软件Rasmol分析酶的三维结构(jiégòu)应用DeepView（蛋白质结构(jiégòu)预测软件）确立天冬氨酸转氨酶的热稳定性有关的功能区域引入随机(suíjī)引物，建立突变基因文库CompoundLibrary感谢您的观看(guānkàn)！内容(nèiróng)总结