会计学临床(línchuánɡ)酶学检验第一节酶活性测定的理论(lǐlùn)基础（一）KmKm是酶的特征性常数之一。若v=0.5Vmax，则Km=[S]，可见Km值等于酶促反应的初速率为最大速率Vmax一半时的底物浓度。Km只与酶的性质有关，而与酶的浓度无关。1．1／Km可近似地表示(biǎoshì)酶对底物的亲和力的大小，Km值越小，表示(biǎoshì)酶与底物的亲和力越大，反之亦然。2．如果一个酶有几种底物，则对每一种底物各有一个特定的Km值，其中Km值最小的底物大都是该酶的最适底物或天然底物。3．如已知酶的Km，可计算(jìsuàn)某一底物浓度时反应速率v和最大速率Vmax的比值，并可推知酶的活性中心被底物饱和的分数。同样，如要求v和Vmax有一定的百分比，也可算出所需底物浓度为其Km的多少倍4．利用工具酶来测定体液中某一成分的浓度或某一酶的催化活性浓度时，可根据米-曼方程或其衍变方程式来计算(jìsuàn)工具酶的用量。5．测定Km值可鉴别不同来源但催化相同反应的酶是同一种酶或是同工酶。6．如一个酶催化正逆两个方向，测定正逆两个方向底物的Km及底物浓度，可大体推测该酶在体内催化反应的方向及其催化效率。7．在代谢酶系中，当一组酶催化连续的代谢反应时，如已知各酶的Km及其相应底物的浓度，有助于寻找代谢的限速步骤。一般Km值最大的酶所催化的反应为该酶系的限速步骤。（二）VmaxVmax表示在一定酶量下的最大反应速率，即酶完全被底物饱和(bǎohé)时的反应速度，与酶浓度呈正比。在酶的浓度不变时，对于特定底物而言，Vmax也是一个常数。（一）延滞(yánzhì)期（二）线性期延滞(yánzhì)期后，在过量底物存在的条件下，酶促反应速率达到最大反应速率并保持相对恒定的一段时期，该期在时间进程曲线中呈直线或接近直线状态，称为线性期(linearphase)。因底物量足够，在线性期酶促反应速率不受底物浓度的影响，产物[P]和底物[S]变化与时间t成直线关系，因此该期的酶促反应速率能反映酶活性的大小。（三）非线性期非线性期又称底物耗尽期，是指线性期后反应速度明显下降(xiàjiàng)，酶促反应进程曲线偏离直线的一段时期。/二、定时(dìnɡshí)法酶活性浓度(nóngdù)测定方法缺点(quēdiǎn)：注意事项①用定时法测定酶活性浓度，必须了解不同酶促反应(fǎnyìng)速率和时间的关系，②应先做预试验找出酶促反应(fǎnyìng)速率恒定的时期，确定线性时间，然后在这段时间进行测定，③避开延滞期和一级反应(fǎnyìng)。（二）酶活性的计算(jìsuàn)三、连续监测(jiāncè)法（动力学法、速率法）（一）连续监测(jiāncè)法的特点（二）酶活性的计算(jìsuàn)连续(liánxù)监测法检测酶活性浓度时，使用摩尔消光系数（ε）。其定义为：特定条件下，一定波长的光，光径为1.0cm时，通过所含吸光物质的浓度为1.00mol/L时的吸光度。自动生物化学分析仪测定同一(tóngyī)酶，条件固定时，从理论上讲V，v和L均为固定值，ε为常数，则可将公式简写为：（三）连续监测法的方法(fāngfǎ)类型2.间接连续(liánxù)监测法反应(fǎnyìng)模式酶偶联反应(fǎnyìng)时相2.酶偶联反应注意事项(1)延滞期应越短越好，测定时间要避开此期。(2)不是所有的酶都适合用酶偶联法进行测定，酶偶联反应V应超过或等于Vx，Ei反应必须是一级反应，即指示酶反应速率和测定酶的产物B浓度成正比。只有使用大量(dàliàng)的Ei及其Km值很小时才能做到。(3)从经济方面考虑应选用一些来源容易且价格便宜的酶（指示酶）制剂。(4)适当的指示酶的用量，反复实验法确定，即做到酶偶联速率不随酶量的增加而升高，并在所选的最适条件下，指示酶偶联反应速率和酶活性浓度成正比。检测方法(fāngfǎ)设计定时法和连续(liánxù)监测法的区别