PCR技术上岗培训.ppt
上传人:天马****23 上传时间:2024-09-15 格式:PPT 页数:29 大小:5.9MB 金币:10 举报 版权申诉
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PCR技术上岗培训疾病的诊断几乎所有的疾病都是基因病56PCR技术PCR技术91.DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA2.退火(25℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。3.延伸(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍。荧光PCR检测技术是在传统PCR技术基础上,加入荧光标记的基因探针,通过探针与扩增产物的结合释放出荧光信号,再通过专门的仪器(荧光PCR仪)对荧光信号的实时检测,经过电脑分析以后,可以准确计算出目的基因的初始数量,实现定量检测。与传统PCR检测相比,荧光PCR检测技术不仅实现了PCR检测从定性到定量的飞跃,而且它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。因此,荧光PCR检测技术自二十世纪九十年代中期出现以来,已成为最具代表性的PCR检测技术,为PCR检测技术临床应用打开了方便之门,现已得到广泛应用。短柄圆环探针荧光PCR原理荧光标记探针荧光标记及影响分子信标的主要因素PCR反应特点实时荧光PCR结果判读荧光PCR试剂盒检测结果19荧光域值(threshold)的设定Ct值PCR诊断试剂生产管理要点荧光定量PCR试剂的质量检查操作程序荧光定量PCR室内质控程序PCR定量为何要设内参照?PCR诊断试剂质量控制要点PCR的假阴性和假阳性产生原因