带电荷量少，亲和力小的先被洗脱下来，带电荷量多，亲和力大的后被洗脱下来。离子交换过程示意：起始吸附解吸完成x+:起始缓冲离子y++：待分离离子z+：待分离离子二、离子交换剂的种类（二）按载体种类不同1.离子交换树脂：主要有聚苯乙烯树脂苯乙烯+二乙烯苯聚苯乙烯（单体）（交联剂）二乙烯苯交联度=————————×100%苯乙烯+二乙烯苯交联度大，网孔变小，大分子量的离子不能进入树脂颗粒内发生离子交换。在不影响分离的情况下，以采用交联度较高的树脂为好，这样可以提高树脂对离子的选择性。目数：离子交换树脂的颗粒直径大小Dowex50为20-50目Dowex20840m50297m100149m（代表二乙烯苯的百分含量）树脂resin（据所含交换基团的性质分）阳离子交换树脂强酸型含磺酸基团(R-SO3H)中等酸型含磷酸基团(-O-PO2H4)弱酸型含酚基、羧基阴离子交换树脂强碱含季胺基团[-N+(CH3)3]弱碱含叔胺、伯胺基团[-N(CH3)2]阴离子交换树脂对化学试剂及热都不如阳离子交换树脂稳定。2.离子交换纤维素阴离子交换纤维素—如:DEAE-纤维素pH8.6以下分离中性或酸性物质,具二乙胺乙基阳离子交换纤维素—如:CM-纤维素一般pH>4条件下使用,具有羧甲基3.离子交换凝胶—分离大分子物质如：葡聚糖（Sephadex）、聚丙烯酰胺（PAG）、琼脂糖（Sepharose）亲水性强,交换容量大,非专一性吸附小,球形颗粒,较纤维素离子交换剂的流速易控制床体积易受溶液的pH和离子强度影响三、操作注意点考虑因素：1.被分离物质带何种电荷2.被分离物质分子的大小大分子物质选用凝胶，其次选用纤维素3.被分离物质所处的环境4.被分离物质的物理化学性质5.被分离物质的大概数量根据分离过程的实验条件强酸强碱—应用广泛弱酸型—只能在碱性pH范围内使用弱碱型—只能在酸性pH范围内使用（二）缓冲液的选择原则：避免使样品变性;不能发生化学反应;在此pH条件下,被分离物质所带的电荷性质与交换剂上的平衡离子相同;需考虑离子交换剂的性质;不影响被分离组分的分析测定.(三)洗脱剂原则：所用洗脱液比吸着物质具有更活泼的离子或基团改变pH或离子强度增强洗脱液与离子交换剂的结合力降低分离物与离子交换剂的结合力洗脱方式：梯度洗脱(四)操作1.离子交换剂的处理:除去过小的颗粒消除杂质转化平衡离子,调节所需的pH2.装柱3.上样4.洗脱5.洗脱液的收集和检测6.再生四、应用离子交换层析法分离氨基酸及测定[原理]紫色物质，用于α－氨基酸的比色测定和纸层析显色AspHispH4.2pH>10[器材][试剂][操作]2、检测：从第2管起每收集管中加入1.5ml茚三酮显色液，充分混合，沸水浴15分钟，自来水冷却，观察氨基酸与茚三酮的显色反应，若生成紫色化合物，则说明收集到氨基酸。OperationofacationexchangecolumnfortheseparationoftheaminoacidsAsp,SerandLys.SeparationofaminoacidsonacationexchangecolumnDifferenttypesofionexchangeresins(a)Cationexchanger(b)Anionexchanger.梯度洗脱示意图