提高凝胶过滤层析分辨率的方法概述摘要：凝胶过滤层析的分辨率高低关系到最后的样品纯度，提高分辨率可得到纯度更高的产物。分辨率的高低与凝胶柱的选择、凝胶的种类、加样量、流速和洗脱液性质有关，在实验过程中，根据目的和要求综合考虑各因素。【关键词】凝胶过滤层析；分辨率；流速Abstract：ThesamplepurityisrelatedtotheresolutionoftheGelfiltrationchromatography.Thus,toobtainahigherpurityproduct,weneedtoimprovetheresolution.theselectionofthegelcolumn,thetypeofgel,theamountofpipetting,flowratecaneffecttheresolution.Considerationofvariousfactors,duringtheexperiment,accordingtothepurposeandrequirements.【Keywords】Gelfiltrationchromatography;resolution;flowrate引言HYPERLINK"http://www.wiki8.com/ningjiao_109217/"\o"医学百科：凝胶"凝胶过滤HYPERLINK"http://www.wiki8.com/cengxi_104854/"\o"医学百科：层析"层析法(gelfiltrationchromatography)也称HYPERLINK"http://www.wiki8.com/fenzi_109921/"\o"医学百科：分子"分子筛层析法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的分子量进行分离和纯化1959年，Porath和Flodin第一次用凝胶过滤分离水溶液中不同分子量的样品。凝胶凝胶过滤层析具有设备简单、操作方便、样品回收率高、实验重复性好、特别是不改变样品生物学活性等优点，因此广泛用于蛋白质(包括酶)、核酸、多糖等生物分子的分离纯化，同时还应用于蛋白质分子量的测定、脱盐、样品浓缩等。因此，凝胶层析广泛的应用于生物化学、高分子化学等方面。在凝胶过滤层析过程中，分辨率与分离效果密切相关，分辨率高，则说明分离效果好，得到的样品纯度高。而在操作过程中，分辨率的高低与很多因素有关，如柱的选择、凝胶的选择、加样量、流速、洗脱液等因素有关。所以，提高凝胶过滤层析的分辨率对提高样品的分离质量有很重要的作用。层析柱对层析分辨率的影响柱的选择层析柱的大小与分辨率有关。一般来说，层析柱长，分辨率高，但是层析柱过长，则会引起柱子不均一、流速过慢、扩散等实验上的一些困难。一般柱长度不超过100cm，为得到高分辨率，可以将柱子串联使用。另外，层析柱滤板下的死体积应尽量小，以防各组分又重新混合，降低分辨率。在胡晓倩等人对蛋白质分离条件的研究中，选用了色谱柱的L/D=100/1,满足了蛋白质分离的高分辨率。凝胶柱的装填凝胶柱的装填效果对分离效果的影响很大，装填后的凝胶柱应用肉眼观察应均匀、无纹路、无气泡。装填均匀的柱子能使样品中的各组分只根据分子量的大小不同来实现分离，有利于提高层析的分辨率。凝胶种类对分辨率的影响不同类型的凝胶在性质以及分离范围上都有较大的差别，所以在进行凝胶层析实验时要根据样品的性质以及分离的要求选择合适的凝胶，凝胶的选择与分辨率的高低有关。对于分离分子量相差较大的分组分离，应选用使高分子量物质不能进入凝胶网孔，而使低分子量的洗脱体积接近于柱床体积，例如蛋白质的脱盐或蛋白、核酸溶液去除小分子杂质以及一些注射剂去除大分子热源物质等等，一般可选用SephadexG-25和G-50，对于小肽和低分子量的物质（1000-5000）的脱盐可使用SephadexG-10，G-15及Bio-Gel-p-2或4.；对于分离分子量相近的分级分离，一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶，层析过程中这些物质都能不同程度地深入到凝胶内部，从而达到提高分辨率的效果。凝胶的颗粒大小也与分离效果相关，一般来说，使用细凝胶颗粒或超细凝胶颗粒时，得到的峰更窄，有利于提高分辨率。样品浓度与加样量的影响3.1样品浓度样品浓度对分辨率也有影响，样品浓度低，会造成组分的过度稀释，降低样品分离效率和分辨率；而样品浓度过高，则会使洗脱峰变形或重叠，也会降低分辨率，因此在层析过程中，应选择适当的样品浓度。例如在分离纯化酪蛋白糖巨肽的研究中，可选用样品浓缩13或25倍来进行分离，能得到较好的分离效果。3.2加样量加样过程要尽量快速、均匀。加样量的多少应根据具体情况而定，一般来说。柱体大或分组分离，加样