PCR技术的基本原理的天然复制过程，PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：--退火--延伸三个基本反应步骤构成寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：的变性：93℃左右一定时间后左右一定时间后，①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；与引物的退火(复性)经加热变性成单链后，55℃左右左右，②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引单链的互补序列配对结合结合；物与模板DNA单链的互补序列配对结合；模板---引物结合物在聚合酶的作用下，为反应原料，③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶引物的延伸：序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又--退火--延伸三过程可成为下次循环的模板。分钟，可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。(Plateau)。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。大几百万倍。(Plateau)。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。PCR的反应动力学的三个反应步骤反复进行，扩增量呈指数上升。PCR的三个反应步骤反复进行，使DNA扩增量呈指数上升。反应最终(1＋计算。片段扩增后的拷贝数，表示平(Y)(Y)均每次的扩的DNA扩增量可用Y＝(1＋X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数，X表示平(Y)均每次的扩增效率，代表循环次数。100%，增效率，n代表循环次数。平均扩增效率的理论值为100%，但在实际反应中平均效率达不到理论值。反应初期，片段的增加呈指数形式，产物的逐渐积累，论值。反应初期，靶序列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的D片段不再呈指数增加，而进入线性增长期或静止期，即出现“停滞效应”NA片段不再呈指数增加，而进入线性增长期或静止期，即出现“停滞效应”，这种效应称平台期数、的种类和活性及非特异性产物的竟争等因素。平台期数、PCR扩增效率及DNA聚合酶PCR的种类和活性及非特异性产物的竟争等因素。大多数情况下，平台期的到来是不可避免的。数情况下，平台期的到来是不可避免的。可避免的PCR扩增产物可分为长产物片段和短产物片段两部分。可分为长产物片段和短产物片段两部分。短产物片段的长度严格地限定5'端之间是需要扩增的特定片段。端之间，在两个引物链5'端之间，是需要扩增的特定片段。短产物片段和长产物片段是由于引物所结合的模板不一样而形成的，以一个原始模板为例，在第一个反应周期中，合的模板不一样而形成的，以一个原始模板为例，在第一个反应周期中，以两条互补的DNA为模板，3'端开始延伸端开始延伸，5'端是固定的端是固定的，端则没有固定的止点，长短不一，为模板，引物是从3'端开始延伸，其5'端是固定的，3'端则没有固定的止点，长短不一，这就是“长产物片段”进入第二周期后，引物除与原始模板结合外，还要同新合成的链(这就是“长产物片段”。进入第二周期后，引物除与原始模板结合外，还要同新合成的链(即5'端序列是固定的，端序列是固定的“长产物片段”)结合。引物在与新链结时，由于新链模板的5'端序列是固定的，这就等于长产物片段”)结合。引物在与新链结时，”)结合3'端被固定了止点端被固定了止点，这次延伸的片段3'端被固定了止点，保证了新片段的起点和止点都限定于引物扩增序列以内、形成长短一致的“短产物片段”。不难看出“短产物片段”是按指数倍数增加，而“长产形成长短一致的“短产物片段”不难看出“短产物片段”是按指数倍数增加，物片段”则以算术倍数增加，几乎可以忽略不计，的反应产物不需要再纯化，物片段”则以算术倍数增加，几乎可以忽略不计，这使得PCR的反应产物不需要再纯化，就能保证足够纯DNA片段供分析1.PolymeraseChainReaction具体内容点击：聚合酶链式反应，简称PCR。又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。由美国科学家PE（PerkinElmer珀