基因片段与载体连接一、实验目的及背景二、DNA分子的体外连接原理连接反应中值得注意的几个问题：T4DNA连接酶作用机制普通Taq酶会在3´末端加一个A，这样所有PCR产物都会在双链DNA的3´端均有一个单链状态的A；T－载体是线状DNA片段，在DNA双链的3´端均有一个单链状态的T；二者在连接酶的作用下连接为一个重组的环状分子，从而达到克隆的目的。2.连接反应的温度3.DNA的平未端和粘性末端4.碱性磷酸酶处理质粒载体5.连接反应的检测三、实验试剂１．纯化后的酶切质粒载体和目的基因。２．１０×Ｔ4DNA连接酶buffer200mMTris-HCl(pH7.6)50mMMgCl250mM二硫苄糖醇500μl/mlBSA３．Ｔ4DNA连接酶４．5mMATP四、实验方法DNA分子的体外连接：五、结果与分析问题与讨论：重组子的转化一、DNA的转化及转化子的筛选二、原理--本实验由二个方面组成:现在制备感受态细胞通常用CaCl2处理，在低温中与外来DNA分子相混合.DNA分子转化分以下几步:１．吸附－－双链DNA分子吸附于受体菌表面；２．转入－－双链DNA分子解链。一条链进入受体菌，另一条降解；３．自稳－－外源质粒DNA分子在细胞内复制成双链；４．表达一供体基因随同复制子同时复制，分裂，转录翻译。重组子的筛选１．抗生素筛选法２互补法三、实验试剂四、实验方法五、结果与分析讨论