一、试验目的二、血凝试验(hemagglutinationtest)HA试验的原理示意图用途：1确定病毒的存在；2测定病毒的血凝价血凝价：能使一定量红细胞发生50%凝集的病毒最高稀释度实验材料器材：96孔V型微量反应板、微量移液器、枪头试剂：1%鸡红细胞(采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，用PBS洗涤3-5次，用PBS配成1%红细胞悬液备用)。试验抗原、PBS缓冲液结果判定1.在各组对照均正确的情况下，按下列标准判定血凝反应强度示意图“4＋”红细胞呈片状凝集，均匀布满孔底，边缘有时不整齐或皱缩。“3＋”红细胞呈片状凝集，但面积略小于“4+”。“2＋”红细胞呈片状凝集，但有少许沉积孔底中部呈小圆点状。“＋”红细胞大部分沉于孔底中央，周围有少量散在凝集颗粒。“－”红细胞均沉于孔底呈小圆点状，边缘整齐。2.对照孔正常的情况下，红细胞凝集100%的稀释度为判定血凝价的终点。凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数为病毒的凝集价。血凝抑制试验步骤1.取96孔V型反应板1块置于水平实验台上，在第1排1-10孔内加入25ulPBS缓冲液，第11孔不加。第12孔加25ulPBS缓冲液。2.在第1孔内加入被检血清25ul，混匀后吸出25ul加入第2孔内，再混匀后吸出25ul加入第3孔内，依次类推至第10孔时弃掉25ul。第12孔不加作阴性对照孔。3.在1-12孔内均加入“四价”血凝素25ul，震荡后，室温静止作用40min。4.在1-12孔内均加入1%的鸡红细胞悬液25ul，震荡，室温30min。5.观测结果，记录实验数据．血凝抑制试验结果判定思考题1、病毒凝集红细胞是不是一种特异的抗原体反应？为什么？2、血凝抑制实验是不是特异的抗原抗体反应?为什么？3、血凝试验中为什么要加补充液？4、为什么加病毒液和红细胞悬液时要反向加？5、血凝试验和血凝抑制试验中空白对照的意义？