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五.V。和Vi的测算(1)重量法但这种算法不够准确,主要原因是Vg难以计算,它和凝胶的水化程度有关。一般粗略地将其估算为1cm3/g干胶。2.Kd及Kav的测算3.分辨率洗脱分辨率图ΔVe=Vi(KdB—KdA)=ΔKdVi分子量的测定方法有两种(2)标准曲线法对于特定的测定系统,先以3个以上(最好更多些)的已知分子的标准蛋白(目前已有配套标准蛋白系列产品出售)过柱,测取各自的Ve值。以Ve作纵坐标,LogM作横坐标制做标准曲线。在同一测定系统中测出未知物质的Ve值便可由标标准曲线求得分子量。分子量在10000~150000之间的球形蛋白用此法测出的分子量误差在10%左右。对于线性分子的误差还可大于此值。(四)分离多组分混合物G-50分离粗制胰岛素图七.数据处理凝胶层析拄洗脱的三部分示意图同时根据已测出的Vo和Vi以及通过量柱的直径和凝胶拄床高度计算出的Vt方便求出Kd和Kav。实验要求;标准样品九.凝胶过滤层析经常遇见的问题(1)胶面不平(7)胶不适当