PCR扩增和电泳检测.ppt
上传人:天马****23 上传时间:2024-09-15 格式:PPT 页数:32 大小:7.8MB 金币:10 举报 版权申诉
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实验13DNA片段的PCR扩增DNA在体内复制的条件是什么?DNA分子的结构合成DNA分子的原料——脱氧核苷三磷酸合成DNA分子的原料——脱氧核苷三磷酸DNA聚合酶不同细胞的细胞周期PCR的概念PCR技术原理PCR三步曲PCR仪用于PCR的预混液(500L体系):ddH2O310L10×butter50LMgCl240LdNTP混合液20L引物125L引物225L模板DNA25LTaqDNA聚合酶5L反应试剂用量PCRSuperMix10μL引物Ⅰ(浓度10μM)1μL引物Ⅱ(浓度10μM)1μL模板DNA5μLddH2O3μL总体积20μL微量可调移液器(一档吸、二档排)PCR反应参数:1、基本概念以琼脂糖凝胶作为介质,DNA在外加电场的作用下泳动的技术。2、实验原理琼脂糖是一种天然聚合长链状分子,可以形成具有刚性的滤孔,凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。琼脂糖凝胶电泳基本原理21将梳子从制胶槽中拔出取出凝胶板放入电泳槽中琼脂糖凝胶电泳中缓冲液的作用1、增加电导率;2、维持电泳过程中的合适的pH。吸取PCR反应产物10µL。注意吸头要插入到管底,才能取到PCR产物。进行电泳10-20分钟实验用的核酸荧光染料与DNA嵌合后,在DNA图谱观察仪的可见光下发射黄绿色荧光。PCR的应用