PCR扩增检测乙肝病毒.ppt
上传人:天马****23 上传时间:2024-09-15 格式:PPT 页数:19 大小:18.1MB 金币:10 举报 版权申诉
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实验三:PCR扩增检测乙肝病毒乙肝病毒(HBV)感染引起的乙型肝炎,我国发病率很高,HBV的检测极其重要。HBVDNA存在就可以引起乙肝的传染,乙肝病毒基因是乙肝病毒的核心成分,是病毒复制的发动机。PCR技术可以检测出极微量的病毒,是判断其传染性最直接、最可靠的证据。PCR技术已成为公认的对病毒性肝炎的诊断、疗效观察及预防研究工作最理想的方法之一。二、实验原理聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction)简称PCR,是在体外条件下利用DNA聚合酶、催化一对引物间的特异性DNA片段合成的基因体外扩增技术,它包括三个基本过程:三、主要器材及试剂1.主要器材:2.主要试剂:四、操作步骤1.标本处理:取患者血清40μl,加入DNA提取液40μl,沸水浴10分钟,10000转离心5分钟,取上清液4μl做PCR反应。2.加样:加入提取好的标本4μl,6000转离心10秒。三个扩增步骤温度及时间4.电泳检测:①制备2%琼脂糖凝胶``③电泳:点样端接“-”,稳压,50V,电泳30分钟。五、结果观察:紫外分析仪下观察,出现橙黄色条带则为HBV阳性五、注意事项1.试剂盒内阳性标本及DNA提取液使用前需充分融化离心。2.反应液的表面为固体封盖剂,电泳取样时从反应管底部吸液。3.EB为强致癌物,操作过程应注意防护。4.注意无菌操作,以免出现假阳性。Thankyou!