重组人生长激素冻干配方筛选和稳定性研究_于忠喜（完整版）实用资料(可以直接使用，可编辑完整版实用资料，欢迎下载）博士、硕士专业学位名称临床医学博士兽医博士口腔医学博士法律硕士教育硕士工程硕士建筑学硕士临床医学硕士工商管理硕士农业推广硕士兽医硕士公共管理硕士口腔医学硕士公共卫生硕士军事硕士会计硕士体育硕士艺术硕士风景园林硕士汉语国际教育硕士翻译硕士目录提要…………………………………………………………………1第一章前言………………………………………………………2第二章实验仪器和材料…………………………………………10第三章rhGH相关蛋白质的确定与研究………………………11第四章rhGH冻干制剂缓冲体系的筛选与确定…………………16第五章rhGH冷冻干燥配方筛选及研究…………………………33总结……………………………………………………………46参考文献…………………………………………………………47中文摘要…………………………………………………………50英文摘要…………………………………………………………52提要人生长激素(HumanGrowthHormone是由脑垂体前叶含有嗜酸性粒细胞所分泌的、由191个氨基酸残基构成的肽类激素,是人体内促进生长的主要激素。high在水溶液中不稳定,易产生氧化、脱酰氨、聚合等变化。文献报道生长激素的氧化位点主要发生在14位和125位的蛋氨酸残基上。生长激素发生氧化、脱酰氨反应之后,其生物活性也会随之下降,氧化和脱氨组分的存在被认为是质量下降的重要表现。另外,剧烈震荡、高温等条件下生长激素易形成二聚体和多聚体,从而降低或丧失生物学活性。因此,防止氧化、脱酰氨、聚合是生长激素制剂研究中的重点,在贮存和运输的过程中保证生长激素的质量和稳定性是非常必要的。冷冻干燥技术是保护重组蛋白质活性最为常见也是最为重要的一种方法,一个好的冻干配方制成的冻干制剂能够长期保持蛋白质或多肽的活性。为此,本论文通过选择缓冲液,摸索其浓度、pH,加入一定量的保护剂、赋形剂和表面活性剂,并对每种添加组分及相关参数进行了一系列摸索、筛选、检测实验,最终确定rhGH冻干制剂配方组成及参数。通过冷冻干燥技术,最大限度维持了重组人生长激素在贮存过程中的稳定性,延长了药品的有效期。第一章前言19世纪,人们在人的脑垂体前叶提取并分离出一种对生长有作用且具有活性的成份,命名为生长激素[1](GrowthHormone,GH。研究证明,生长激素对骨骼,内脏和全身的生长都有重要作用,而且对蛋白质合成、脂肪、糖类的代谢速率都有影响,故生长激素在人体生长发育中是不可或缺的。1.1人生长激素与重组人生长激素(RecombinantHumanGrowthHormone,rhGH人生长激素是由191个氨基酸残基构成的单一肽链的激素,分子量为22KD左右,有2个二硫键[2],pI=5.2,分子中无糖基化。high的基本功能是刺激机体组织的发育,促进人体的骨骼,软骨和组织的生长,生长激素对中间代谢及能量代谢也有影响。具体可促进蛋白质合成,增强对钠、钾、钙、磷、硫等重要元素的摄取与利用,同时通过抑制糖的消耗,加速脂肪分解,使能量来源由糖代谢转向脂肪代谢。人在幼年时,如果生长激素分泌不足,会导致生长发育迟缓,身体长得特别矮小,称“侏儒症”;如果生长激素分泌过多,可引起全身各部过度生长,骨骼生长尤为显著,致使身材异常高大,称“巨人症”。成年后,骨骺已融合,长骨不再生长,此时如生长激素分泌过多,将刺激肢端骨、面骨、软组织等增生,表现为手、足、鼻、下颌、耳、舌以及肝、肾等内脏显示出不相称的增大,称“肢端肥大症”。对侏儒症应尽早给予生长激素治疗,巨人症和肢端肥大症如果是垂体前叶肿瘤所致,可进行局部放射线照射治疗或手术切除,大剂量雌激素有抑制垂体分泌生长激素的作用。早在二十世纪八十年代,由于生长激素来源稀少,导致其未能得到广泛应用[3]。近年来科学家已用基因工程方法将人类生长激素基因从染色体DNA链上分离出来,重组到质粒上,并用大肠杆菌进行表达,依靠大肠杆菌发酵生产重组人生长激素。rhGH的氨基酸含量、空间构象及序列与人生长激素完全相同,具有与人体内源性生长激素等同的生物学作用:刺激骨骺端软骨细胞分化、增殖,刺激软骨基质细胞增长,刺激成骨细胞分化、增殖,引起线性生长加速及骨骼变宽;促进全身蛋白质合成,纠正手术等创伤后的负氮平衡状态,纠正重度感染及肝硬化等所致低蛋白血症;刺激免疫球蛋白合成,刺激淋巴样组织、巨噬细胞和淋巴细胞的增殖,增强抗感染能力;刺激烧伤创面及手术切口胶原体细胞合成纤维细胞以及巨噬细胞分裂增殖,加速伤口愈合;促进心肌蛋白质合成,增加心肌收缩力,降低心肌耗氧量,调节脂肪代谢,降低血清胆固醇