试验二质粒DNA电泳鉴定.ppt
上传人:天马****23 上传时间:2024-09-10 格式:PPT 页数:26 大小:5.5MB 金币:10 举报 版权申诉
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实验目的实验原理及背景知识简介琼脂糖凝胶电泳分离原理DNA分子在高于等电点的PH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。在一定电场强度下,DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数成反比。DNA电泳影响因素(一)DNA电泳影响因素(二)电泳缓冲液目前有3种缓冲液适用于天然双链DNA的电泳:TAE、TBE和TPE,其组成及特点见表2.2。一般常用的DNA电泳选用TAE较多,其电泳时间较快,而且成本比较低,但是其缓冲容量较低,需经常更换电泳液。琼脂糖凝胶电泳中常用的缓冲液电泳指示剂溴酚兰在碱性液体中呈紫兰色,一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成上样缓冲液。作用:①增加样品比重,以确保DNA均匀沉入加样孔内。②形成肉眼可见的指示带,预测核酸电泳的速度和位置。③使样品呈色,使加样操作更方便。溴化乙锭(EB)是一种荧光染料,EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间,在紫外线激发下,发出红色荧光。其荧光强度与DNA的含量成正比。据此可粗略估计样品DNA浓度。琼脂糖凝胶EB染色,肉眼可见核酸电泳带,其DNA量一般>5ng。实验材料及器材微波炉——溶胶用凝胶电泳仪及电泳槽凝胶成像系统实验准备工作实验步骤——(一)制胶实验步骤——(二)点样实验步骤——(三)电泳分离及结果观察DNA电泳图谱注意事项思考