第一节电泳的基本理论及分类一、原理2、原理电泳技术就是利用在电场作用下，由于待分离样品中各种分子带点性质以及分子本身大小、性状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯。迁移率与带电分子所带净电荷成正比，与分子的大小和缓冲液的黏度成反比（二）影响电泳的主要因素二、分类1、按有无固体支持物可以分为两类：自由电泳和支持物电泳。第二节常用电泳分离技术一、聚丙烯酰胺凝胶电泳（二）影响凝胶聚合的因素1、试剂质量2、凝胶浓度3、温度和氧气的影响（三）聚丙烯酰胺胶体的制备（四）聚丙烯酸胺凝胶电泳的特点与用途1、电渗作用比较小2、凝胶孔径可调3、电泳分辨率高4、化学稳定性和热稳定性好5、机械强度高二、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（二）SDS-聚丙烯酰胺凝胶胶体的制备（三）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的优缺点及应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳具有设备简单，样品用量甚微，操作方便等优点，现已成为测定大多数蛋白质分子量的常用方法三、等电聚焦电泳（二）pH梯度的建立产生pH梯度的方法通常有两种：一种是用两种不同pH的缓冲液互相扩散，在混合区形成pH梯度，称为人工pH梯度。但这种pH梯度不很稳定，常用于制备电泳。另一种是利用两性电解质载体（Carrierampholytes）在电场的作用下自然形成pH梯度，称为天然pH梯度。（三）支持pH梯度的介质（1）梯度溶液（2）凝胶（四）等电点聚焦电泳的操作过程1、pH梯度支持介质的制备2、电泳3、分离组分的检测（五）等电聚焦电泳的特点及应用优点：（1）具有很高的分辨率（2）显现的区带窄（3）聚焦力强（4）可直接并准确测出等电点等电聚焦技术的缺点是：①等电聚焦要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀；②样品中的成分必须停留在其等电点处，不适用于在等电点不溶或发生变性的蛋白质四、其他电泳技术（二）醋酸纤维素薄膜电泳用醋酸纤维素条带或塑料薄膜做支持物来进行的电泳特点是分离快速，在低电压下，仅0.5～2h，分离出来的区带非常清晰鲜明，背景完全无色，操作方便，加上不会像纸电泳那样，造成蛋白质的变性，所以醋酸纤维素已在多种用途上完全取代滤纸电泳，而得到比滤纸电泳更理想的结果，醋酸纤维素溶解在丙酮里，被分离的区带就可以用比色计测定，非常准确选择聚丙烯酰胺凝胶浓度参考值制胶模1梳形样品槽模板2长玻璃板（后面）3短玻璃板（前面）4U形橡胶框不连续电泳三层凝胶的性质等电聚焦电泳槽