聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质.ppt
上传人:天马****23 上传时间:2024-09-10 格式:PPT 页数:20 大小:1.4MB 金币:10 举报 版权申诉
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实验原理聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶为载体的一种区带电泳。该凝胶由丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N—甲叉双丙烯聚酰胺(Bis)聚合而成。利用电泳和分子筛的双重作用分离物质。材料与试剂2.制分离胶:按所需的浓度配制12.5%分离胶。4.灌完浓缩胶,插入梳子。等到浓缩胶自然凝聚后,将装置放入电泳槽内,加入电泳缓冲液,小心地拔出梳子,如果拔出梳子后加样孔之间的间隔发生扭曲,可以用注射器针头小心地加以整理。5.加样:取大肠杆菌和BSA蛋白样品加样,每个加样孔加样不宜过多,一般每孔加样7.5L。6.电泳:先恒压80V,待样品进入分离胶后,调电压为120V(恒压)。当溴酚蓝移动到离底部约0.5cm时,停止电泳。注意事项(1)Acr和Bis均为神经毒剂,对皮肤有刺激作用,操作时应戴手套和口罩。(2)玻璃板表面应光滑洁净,否则在电泳时会造成凝胶板与玻璃板之间产生气泡。(3)样品槽模板梳齿应平整光滑。(4)灌凝胶时不能有气泡,以免影响电泳时电流的通过。(5)切勿破坏加样凹槽底部的平整,以免电泳后区带扭曲。(6)电泳时应选用合适的电流、电压,过高或者过低都会影响电泳效果。(7)稀释5×SDS/电泳缓冲液至1×浓度灌入电泳槽,需800毫升。移液枪的使用方法使用干净的枪头移液器的使用手法,两档位去枪头的方法1.将红色玻璃夹子底座朝下、卡口打开呈直角状,放入厚薄两片玻璃,薄玻璃朝向自己。注意厚玻璃箭头向上,旁边两条小玻璃条与薄玻璃接触,使之形成一个间隙。3.将做好的玻璃夹放在制胶架上,注意薄玻璃朝向自己,厚玻璃上的箭头向上。按弹簧夹,将玻璃夹卡入制胶架。在玻璃的间隙内灌胶,放上梳子,待胶凝固。5.将底座的开关打开,并向外拨动透明的架子,使中间空隙增大,放入电极架。7.关上底座开关。