临床PCR检测技术实习生讲课KaryB.MullisUSA,forhisinventionofthepolymerasechainreaction(PCR)method一、PCR概述CT值-X0作图定性PCR测定的临床意义也可取抗凝血标本,但一般不推荐。CTlg(1+E)=-lgX0+lg(RT-RB)–lgRs（二）荧光定量PCR原理DNA---2μly=x(1+e)nTaq酶---1μl当循环次数n=CT值时：CT=-klogX0+b来自同一靶序列前一次PCR的扩增产物。延伸72C5min。小于105拷贝/ml，日常生活接触传染性较小8000g离心1min四、PCR检测的临床应用其他组织标本：留于无菌试管。PCR概述——2000至年发表论文1280748篇一、PCR概述二、实验步骤二、实验步骤3、细胞或组织（二）扩增（三）结果判读（四）PCR的常见问题及处理措施（三）PCR的常见问题及处理措施酶法控制尿嘧啶DNA糖基化酶（UNG)短于100bp的PCR产物不能用UNG完全消除污染。紫外线表面照射消除试剂、加样头中的DNA污染。对短PCR产物效果不好以预防污染为主良好的实验室操作TaqMan探针指数期PCR定量方程才有效PCR曲线起点定量与终点定量同一个样品重复96次起点定量的关键：CT值CT起始DNA浓度CT值-X0作图四、PCR检测的临床应用项目项目（二）结果分析、报告及解释1.定性PCR与定量PCR的比较2.定量PCR测定的临床意义3.定性PCR测定的临床意义4.定性和定量测定的结果报告及解释琼脂糖凝胶电泳定量PCR扩增曲线图某患者HBV-DNA的PCR结果动态图MullisUSA,forhisinventionofthepolymerasechainreaction(PCR)method痰液：患者深部咳痰1～3ml于无菌加盖试管。Rn=RB+X0(1+E)nRs定性PCR与定量PCR的比较dNTP---1μlMullisUSA,forhisinventionofthepolymerasechainreaction(PCR)method短于100bp的PCR产物不能用UNG完全消除污染。来自其他测试样品的DNACT值-X0作图拐点产物数量：重现性好H2O---34μl对短PCR产物效果不好PrimerF---2μl小于105拷贝/ml，日常生活接触传染性较小Taq酶---1μl4.定性和定量测定的结果报告及解释大于107拷贝/ml，日常生活接触强传染性。小于105拷贝/ml，日常生活接触传染性较小但不管HBV-DNA的浓度为多少，哪怕是低于检测下限，也均会引起输血后的感染。谢谢观看！感谢观看