鼠疫实验室检测技术鼠疫实验室检测鼠疫菌的生化检查、营养需求、毒素检测、毒力测定等。双抗原夹心法测抗体：固定于NC膜上的鼠疫F1抗原(F1Ag)+标本中待测抗体(F1Ab)+金标记的F1抗原(金标-F1Ag)显色。待测标本1µl用F1抗体致敏血球，检查鼠疫特异性F1抗原。1R5’-ACCTGCTGCAAGTTTACCGCC-3’鼠疫菌涂片的革兰氏染色Yersiniapestis免疫荧光染色PCR反应体系(总量25µl)采用其它总量时，下列配方按比例改变。内部对照质粒与不同浓度EV菌鼠疫噬菌体试验可快速诊断鼠疫菌。内部对照：以鼠疫菌EV株DNA为模板，采用上述f1引物扩增出fra基因249bp片段，再以16SrRNA基因引物：PCR扩增结果在18~22℃鼠疫噬菌体只能裂解鼠疫菌而不裂解假结核菌，具有较强的专一性(噬菌作用具有种的特异性)，是鼠疫细菌学诊断中特异的鉴定方法之一。鼠疫噬菌体试验可快速诊断鼠疫菌。染疫动物或患者及其尸体的新鲜脏器制备的压印片，可见到两端钝圆、两极浓染的典型鼠疫菌。2ml）荧光染色，室温作用30分钟，流水冲洗。鼠疫菌染色检查(脏器压印片)鼠疫菌染色鼠疫菌染色检查二、鼠疫菌的培养特性鼠疫噬菌体试验鼠疫菌培养及鼠疫噬菌体试验鼠疫菌培养及鼠疫噬菌体试验三、鼠疫F1抗原、抗体检测间接红血球凝集试验(IHA)反向血球凝集试验(RIHA)酶联免疫吸附试验(ELISA)胶体金免疫层析法(GICA)GICA双抗体夹心法—测抗原免疫荧光技术(IFT)鼠疫菌特异性基因片断检测—PCR鼠疫PCR反应体系用FITC-FIMcAb适量（0.双抗原夹心法测抗体：固定于NC膜上的鼠疫F1抗原(F1Ag)+标本中待测抗体(F1Ab)+金标记的F1抗原(金标-F1Ag)显色。胶体的每一孔中加入上述处理的反应产物8µl，在80--100V(不超过5V/cm)电压下TBE缓冲液中电泳约1小时。分离到鼠疫噬菌体，可以间接判定检材中存在鼠疫菌。鼠疫菌特异性基因片断检测—PCR双抗原夹心法测抗体：固定于NC膜上的鼠疫F1抗原(F1Ag)+标本中待测抗体(F1Ab)+金标记的F1抗原(金标-F1Ag)显色。免疫荧光技术(IFT)双抗原夹心法测抗体：固定于NC膜上的鼠疫F1抗原(F1Ag)+标本中待测抗体(F1Ab)+金标记的F1抗原(金标-F1Ag)显色。PCR反应体系(总量25µl)采用其它总量时，下列配方按比例改变。pla2F5’-ACTACGACTGGATGAATGAAAATC-3’456bpR5’-TCAACCCCTTCCTCCTCGCT-3’PCR反应体系(总量25µl)采用其它总量时，下列配方按比例改变。反向血球凝集试验(RIHA)检测鼠疫菌特异性抗原、抗体的金标技术以GICA广泛用于实践。fra1F5’-GGAACCACTAGCACATCTGTT-3’249bp多重PCR扩增结果鼠疫菌质粒检测谢谢观看！感谢观看