会计学3、定向进化的一般(yībān)过程4、酶定向进化的意义(yìyì)二、酶分子(fēnzǐ)定向进化的历史1981年，等定向改变E.coliK12中ebg酶的底物专一性，开发出对几种糖苷键有水解能力的酶。1993年，Arnold研究组提出(tíchū)易错PCR的方法。1994年，Stemmer将DNA重组方法引用到酶分子的定向进化中。1999年，Stemmer等把DNA改组延伸到族改组。三、酶分子(fēnzǐ)的定向进化1、定向进化的过程(guòchéng)2、多样性的产生(chǎnshēng)（1）易错PCR(error-pronePCR)（2）连续(liánxù)易错PCR(Sequentialerror-pronePCR)（3）DNA改组(gǎizǔ)技术(DNAshuffling)（a)单个基因(jīyīn)的DNA改组DNA改组与常规(chángguī)定向进化的比较（b)基因家族(jiāzú)改组技术(familyshuffling)(c)DNA改组(gǎizǔ)原理（d）随机引物体(wùtǐ)外重组法(RPR)（e）交错(jiāocuò)延伸原理采用基因家族的改组效果明显(míngxiǎn)高于单个基因的改组效果。特点：改组基因的效率高；提高基因突变机率。五、基因文库的构建(Ɡòujiàn)2、突变体基因的构建(Ɡòujiàn)策略3、构建突变基因文库的载体(zàitǐ)系统（2）质粒载体系统载体选择基因(jīyīn)重组组装突变基因(jīyīn)文库。体外操作简便，载体本身的设计上有很大可塑性；最大优点是能实现对基因(jīyīn)文库的功能性筛选；缺点是插入片段的载体容量较小，含有长片段的重组克隆在文库的群体扩增过程中容易丢失；转化效率普遍较低；不适合文库的长期保存。4、文库(wénkù)的筛选5、定向进化的筛选(shāixuǎn)6、高通量筛选(shāixuǎn)技术（2）酶活力(huólì)检测（3）噬菌体显示(xiǎnshì)筛选模式（4）pH指示剂显色(xiǎnsè)高通量筛选（5）产物(chǎnwù)显色筛选（6）荧光产物(chǎnwù)筛选（7）基于(jīyú)比色法和荧光检测的高通量筛选六、酶定向进化技术(jìshù)应用感谢您的观看(guānkàn)！内容(nèiróng)总结