课题3 血红蛋白的提取和分离 (4).ppt
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知识回顾--------有关蛋白质的几个问题:知识回顾--------有关蛋白质的几个问题:血红蛋白含有四条肽链,每条肽链环绕一个亚铁血红素基团,此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳,血红蛋白因含有血红素而呈红色。本课题的主要内容如下:一、基础知识:一、基础知识--蛋白质提取和分离原理阅读并回答(P64)1、凝胶色谱法另一个名称是什么?2、凝胶色谱法分离蛋白质的依据是什么?3、凝胶的实质是什么?4、凝胶色谱法的原理是什么?1、凝胶色谱法的别名:分配色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。原理:当不同的蛋白质通过凝胶时,相对()的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程(),移动速度(),而()的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在()移动,路程(),移动速度(),相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。用凝胶色谱法分离蛋白质时,分子量大的蛋白质A.路程较长,移动速度较慢B.路程较长,移动速度较快C.路程较短,移动速度较慢D.路程较短,移动速度较快相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个1、之前在什么地方遇见过缓冲物质?由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。如H2CO3/NaHCO3,醋酸/醋酸钠,NaH2PO4/Na2HPO4等基础知识(三)电泳阅读的相关内容,回答以下问题:1、电泳的概念;2、电泳的原理;3、电泳的种类;4、SDS的作用。2.凝胶电泳法:(三)电泳使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中,不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A电荷的多少B分子的大小C肽链的多少D分子形状的差异样品处理血液组成成分1.洗涤红细胞采集得到猪血初次离心后的结果3次洗涤后的结果2.释放血红蛋白(2)血红蛋白的释放:磁力搅拌器2、粗分离血红蛋白溶液:第1层(最上层):甲苯层(无色透明)4.透析血红蛋白练习巩固2、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是A调节pHB维持红细胞的能量供应C防止微生物生长D防止血液凝固样品处理纯化--凝胶色谱操作装配好的凝胶柱(二)凝胶色谱操作返回2.凝胶色谱柱的装填3、凝胶色谱柱的装填注意事项:3.样品加入与洗脱3.样品加入与洗脱收集得到的纯化后的血红蛋白样品的加入和洗脱的操作不正确的是A.加样前,打开色谱柱下端的流出口,使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面B.加样后,打开下端出口,使样品渗入凝胶床内C.等样品完全进入凝胶层后,关闭下端出口D.用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端,不要破坏凝胶面下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作,其中正确的是()A.可采集猪血作为实验材料B.用蒸馏水重复洗涤红细胞C.血红蛋白释放后应低速短时间离心D.洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液观察你处理的血液样品离心后是否分层(见教科书图5-18),如果分层不明显,可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外,离心速度过高和时间过长,会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,也得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度。2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生?你的色谱柱装填得成功吗?你是如何判断的?如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话,能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整,随着洗脱液缓慢流出;如果红色区带歪曲、散乱、变宽,说明分离的效果不好,这与凝胶色谱柱的装填有关。知识总结3.电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷()的电极移动。A相同B相反C相对D相向4.哺乳动物和人的成熟的红细胞中的()与氧气的运输有关。A血红蛋白B肌红蛋白C肌动蛋白D肌球蛋白5.血液由血浆和各种血细胞组成,其中()的含量最多。A白细胞B血小板C红细胞D淋巴细胞6.为防止血液凝固,在采血容器中要预先加入抗凝血剂()。A.NaClB.甲苯C.蒸馏水D.柠檬酸钠7.将搅拌好的混合液转移到离心管中,离心后,可以明显看到试管中的溶液分为4层,其中第3层是()A无色透明的甲苯层B脂溶性物质的沉淀层C血红蛋白的水溶液D其他杂质的暗红色沉淀物教学反馈