课题3血红蛋白的提取和分离P64阅读课本P64-66“基础知识”完成：了解感知（一）、（二）、（三）在课本中勾画出相应的知识点P64P64P65P65P66阅读课本P66-70“操作提示”了解感知（四）、（五）深入学习1、2、3在课本中勾画出相应的知识点实验操作步骤P66P67P67P67P67P67P68P68P69P66P69P70思考课本P70“结果分析与评价”1、2、3P70课本练习和导学提纲答案课本P70练习一、了解感知(一)凝胶色谱法1、概念：也称做；是根据－分离蛋白质的有效方法。2、原理（1）由构成的凝胶，内部有许多贯穿的的。（2）当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度，而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度，从而使不同的蛋白质分子得以分离。(二)、缓冲溶液1、作用：在一定范围内，抵制的对溶液pH的影响，维持pH。2、配制：由种缓冲剂溶解于中配制而成，通过调节缓冲剂的就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。(三)、电泳1、概念：指在电场的作用下发生的过程。2、原理：在一定的下，、等生物大分子的可解离基团会带上或，在的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。3、作用：电泳利用了待分离样品中各种分子的差异及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中的分离。4、方法：常用的电泳方法有和。测定蛋白质分子量时通常使用。(四)、实验操作1.样品处理及粗分离①目的：去除。②方法：离心（速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果），重复洗涤次，直至上清液中已没有，表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少。(2)血红蛋白的释放加到体积，再加40％体积的（溶解细胞膜），置于上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白。(3)分离血红蛋白溶液：将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10min，试管中的溶液分为4层:第1层（最上层）：甲苯层第2层（中上层）：的沉淀层，色薄层固体第3层（中下层）：的水溶液层，的液体第4层（最下层）：其它杂质的沉淀层(4)透析，方法：将血红蛋白溶液装入，将放入一定量适宜浓度的中，透析。目的：将的杂质除去。2.凝胶色谱制作(3)样品的。3、纯度鉴定：在鉴定的方法中，使用最多的是—。五、操作提示1、红细胞的洗涤：、与十分重要。过少，无法除去血浆蛋白；过高和过长会使等一同沉淀，达不到分离效果。2、色谱柱填料的处理：商品凝胶使用前需直接放在中膨胀，可以将加入其中的用加热，加速膨胀。3、凝胶色谱柱的装填：在装填凝胶柱时，不得有气泡存在。气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的，降低。4、蛋白质的分离：如果红色区带地移动，说明色谱柱制作成功。二、深入学习1、人们用鸡的红细胞提取DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？2、洗涤红细胞时为什么不能用蒸馏水代替生理盐水?3、在血红蛋白释放过程中。加入蒸馏水和甲苯的目的是什么?