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病毒感染的实验诊断什么是病毒?特点:体积微小,只能在电镜下观察,能通过滤菌器无完整的细胞结构:蛋白质衣壳+核酸核心只有一种类型核酸:RNA或DNA有严格的细胞内寄生性,只能在活细胞内生长以核酸复制的方式增殖,不能进行二分裂繁殖抵抗力特殊:耐冷不耐热,对化学因素的抵抗力较一般比细菌强,耐甘油,对抗生素及磺胺类药物不敏感,干扰素可抑制病毒复制。病毒感染的实验诊断方法一、标本采集、运送和处理2.电镜及免疫电镜检查三、病毒的分离与鉴定(一)病毒的分离1.组织培养动物新鲜组织(人胚肾等)→胰酶消化→营养液培养→单层细胞(原代细胞)原代细胞→胰酶消化→转种培养(次代培养细胞)对病毒敏感,但制备费时费力,只能传2~3代。二倍体细胞株原代细胞反复传代(50~70代)仍保持二倍体染色体特性。病毒分离和疫苗制备的首选细胞株。传代细胞株来源于肿瘤细胞或突变的二倍体细胞,能在体外无限增殖。增殖快,不易衰老,易于传代保存。常用于病毒的分离鉴定,但不能用于制备疫苗。优点细胞来源广、敏感细胞株多不受机体免疫因素的影响,个体差异小病变结果易于观察可用于病毒的分离鉴定和制备疫苗及抗原缺点条件要求相对较高,有细胞培养条件的实验室才能做2.鸡胚培养绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤优点鸡胚来源充足,操作简便,有多种接种途径病毒增殖快,可收获大量病毒鸡胚本身是无菌的,对接种的病毒不产生抗体缺点易感病毒少,目前主要用于流感病毒、腮腺炎病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养。某些病毒在鸡胚内传代后,其毒力下降3.动物接种优点方法简单、结果易于观察选择适当的接种途径,可出现类似人类的感染症状,有利于发病机制的研究缺点可自然带毒或隐性感染,干扰实验结果有个体差异很多病毒无敏感动物,或感染后不出现明显症状(二)病毒的鉴定病毒在细胞培养中的表现3.干扰现象(interference)当两种不同的病毒同时或先后感染同一细胞时,其中一种病毒可抑制另一种病毒的增殖,称为病毒的干扰现象。干扰现象也可被相应特异性抗体抑制,称为干扰抑制现象4.红细胞吸附及吸附抑制试验病毒的理化性质测定病毒的血清学鉴定四、病毒的血清学诊断病毒血清学试验常用方法中和试验的特点:特异、敏感,既可检测抗体,也可测定抗原(定属、定型)。既可用细胞培养做,也可用动物或鸡胚接种,以细胞培养法最常用。检测IgG,不能用于早期诊断,常用于流行病学调查。(二)补体结合试验(四)血凝及血凝抑制试验五、病毒抗原检查六、病毒的分子生物学检测