《环境微生物新技术》课程作业2.微生物数量测定方法有哪些?空气、水、土壤样品分别适用哪些方法？请举例说明。常见微生物数量得测定方法<1>计数器测定法:即用血细胞计数器进行计数、取一定体积得样品细胞悬液置于血细胞计数器得计数室内,用显微镜观察计数。由于计数室得容积就是一定得(O。1mm3),因而根据计数器刻度内得细菌数,可计算样品中得含菌数、本法简便易行,可立即得出结果。本法不仅适于细菌计数,也适用于酵母菌及霉菌孢子计数、电子计数器计数法:电子计数器得工作原理就是测定小孔中液体得电阻变化,小孔仅能通过一个细胞,当一个细胞通过这个小孔时,电阻明显增加,形成一个脉冲,自动记录在电子记录装置上、该法测定结果较准确,但它只识别颗粒大小,而不能区分就是否为细菌。因此,要求菌悬液中不含任何碎片。3、活细胞计数法:常用得有平板菌落计数法,就是根据每个活得细菌能长出一个菌落得原理设计得。取一定容量得菌悬液,作一系列得倍比稀释,然后将定量得稀释液进行平板培养,根据培养出得菌落数,可算出活菌数、此法灵敏度高,就是一种检测污染活菌数得方法,也就是目前国际上许多国家所采用得方法。使用该法应注意:①一般选取菌落数在３0~300之间得平板进行计数,过多或过少均不准确;②为了防止菌落蔓延,影响计数,可在培养基中加入O。001%2,3,５一氯化三苯基四氮唑(TTＣ);③本法限用于形成菌落得微生物。广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料得细菌检验,就是最常用得活菌计数法。4、比浊法比浊法就是根据菌悬液得透光量间接地测定细菌得数量、细菌悬浮液得浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比,所以,可用光电比色计测定菌液,用光密度(OＤ值)表示样品菌液浓度、此法简便快捷,但只能检测含有大量细菌得悬浮液,得出相对得细菌数目,对颜色太深得样品,不能用此法测定。5、测定细胞重量法此法分为湿重法与干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重;干重法系单位体积培养物经离心后,以清水洗净放人干燥器加热烘干,使之失去水分然后称重。此法适于菌体浓度较高得样品,就是测定丝状真菌生长量得一种常用方法。6、测定细胞总氮量或总碳量氮、碳就是细胞得主要成分,含量较稳定,测定氮、碳得含量可以推知细胞得质量。此法适于细胞浓度较高得样品。7、颜色改变单位法(ｃolｏｕｒｃhａngeunｉt,简称CCU)通常用于很小,用一般得比浊法无法计数得微生物,比如支原体等,因为支原体得液体培养物就是完全透明得,呈现为清亮透明红色,因此无法用比浊法来计数,由于支原体固体培养很困难,用cｆｕ法也不容易计数,因此需要用特殊得计数方法,即CＣU法。它就是以微生物在培养基中得代谢活力为指标,来计数微生物得相对含量得,下面以解脲脲原体为例单介绍其操作:(1)取12只无菌试管,每一管装1。8ml解脲脲原体培养基。(２)在第一管加入0。2mｌ待测解脲脲原体菌液,充分混匀,从中吸取0.２mｌ加入第二管,依次类推,１０倍梯度稀释,一直到最末一管(3)于3７度培养,以培养基颜色改变得最末一管作为待测菌液得CCU,也就就是支原体得最大代谢活力,比如第六管出现颜色改变,她得相对浓度就就是１０得6次方CCU／mｌ.取一定体积得样品细胞悬液置于血细胞计数器得计数室内,用显微镜观察计数或做片在显微镜下数,均称为显微镜直接计数法。用琼脂平板计数,称为菌落计数法、一般来说,比浊法与菌落计数法就可以满足绝大多数细菌得计数,但就是对支原体这样比较特殊得微生物,用CCU法比较合适、＜２〉微生物主要包括原核微生物、真核微生物、病毒等三大类,由于多数微生物得个体较小,肉眼无法观察,对其计数一般比较困难。在目前得微生物实验教学,对微生物计数得方法主要有三大类:总细胞计数法、活细胞计数法与微生物生长量测定法。并不就是每一种方法都就是通用得,不同得微生物种类需要不同得计数方法,目前多用以下8种方法进行计数:１、总细胞计数法１。1血细胞计数板计数法血细胞计数板就是一块特制得载玻片,其上划有计数室,通过对计数室中得微生物数量得读取,计算原溶液中得微生物数量。此方法由于计数板较厚,且计数室得高度就是０.1mm,不能采用油镜进行观察,故只能对体积较大得真核微生物进行测定,如酵母菌、霉菌抱子等,只能测得所有细胞得总数,不能区别死细胞与活细胞,尤其就是对运动能力强得活细胞难以计数。目前已经提出一些方法,如结合特定得美蓝染色技术,区别酵母菌死活细胞,将运动得细胞加人甲醛溶液中,破坏其运动以便计数等。１.2细菌计数板计数法细菌计数板就是在血细胞计数板得基础上改进而来,主要就是降低计数板得厚度,同时将计数室得高度从0、1mm降低到０、02mm,以用油镜对较小得原核微生物进行计数、１、3膜过滤计数