Cu2+对豆芽遗传物质的影响实验方案：一、实验原理：环境的三致性，即指环境对生物的致畸、致癌、致突变性，是目前环境污染中最主要的问题。三致的根本在于致突变，致畸、致癌常常是致突变的结果。微核是无着丝点的染色体断片，在有丝分裂后期不能向两极移动，所以游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，即可在它附近看到一到几个很小的圆形结构，直径大约是细胞直径的1／20－1／5，这就是微核（micronucleus）。微核是常用的遗传毒理学指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。由于这种损伤会因细胞受到的外界诱变因子的作用而加剧，而微核产生的数量又可与诱变因子剂量的强弱呈正比。根据植物E.haichowensis在低浓度Cu污染的环境下（250µmol/l），Cu似乎对种子萌发有一定的刺激作用，但是当浓度超过750µmol/l时，萌发率就随着Cu浓度的增加而降低了，当浓度增至2000µmol/l时，萌发率则低于40%，与对照相比降低了一半[3]。设计相应的五个浓度梯度Cu处理，并设计一个用蒸馏水处理的对照实验组。二、实验材料：1．器材光学显微镜、500ml烧杯1个、10ml试管12个、试管塞12个、发芽盒6个、洗瓶、镊子、载玻片12个、盖玻片6个、滤纸、培养皿6个、托盘或解剖盘1个。2．材料豆芽种子3．试剂硫酸铜（6mmol/l、3mmol/l、1.5mmol/l、0.75mmol/l、0.375mmol/l）卡诺氏固定液：由3：1的乙醇和冰醋酸配制；水解分离液：盐酸与酒精1：1混合；改良苯酚品红染液蒸馏水三、实验步骤：1、种子处理选取30~50颗饱满的豆芽种子，洗净后在室温下用蒸馏水浸泡发芽24小时，然后移入铺有纱布的托盘内培养。一天观察一次，当初生根长到2cm时，取发育良好的，大小与根长近似的幼根。将选好的豆芽分别放入六个发芽盒中，每个发芽盒中放5棵豆芽，使根尖完全浸入处理水样中，室温下培养48小时后，用蒸馏水洗根尖2次，每次2min，把洗净的豆芽放在新铺滤纸的培养皿中，25℃恒温培养使根尖细胞恢复24小时，设蒸馏水处理为空白对照。2、固定借助于卡诺氏固定液的作用，迅速透入组织和细胞将之杀死，并且使其结构和内含物如：蛋白质，脂肪，糖类以及核物质与细胞器等，在形态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态，同时更易于染色，可以较清楚的显现细胞在生活时不易看清的结构。固定时在10ml试管内放入卡诺氏固定液约5毫升，用刀片或小剪刀切取经过处理的长约0.5—1厘米的根尖5—10条，放入试管内，用塞盖紧，在室温下固定2—24小时。3、水解分离水解分离的作用是去除未固定的蛋白质,同时使胞间层的果胶类物质解体，细胞分散而易于观察。取处理好的材料，放在试管内加水解分离液2毫升，室温下处理8—20分钟，倒去水解分离液，再加入固定液2毫升，进行软化5min，软化对细胞壁起腐蚀作用。然后倒去固定液，用蒸馏水反复冲洗使材料呈白色微透明，以镊子柄能轻压碎好。4、染色压片改良苯酚品红染色法：切取根尖分身组织放在载玻片上纵横切成几段，放在载玻片上，覆以载玻片，用镊子柄或铅笔头轻敲几下，再用拇指用力下压，注意不要使玻片移动，分开两玻片，滴上1—2滴染液，20—30分钟后加上盖玻片，注意不要有气泡产生，用吸水纸吸去多余染液。5、观察每组根尖细胞观察至少１００个细胞，记录出现微核的细胞个数，计算微核率。123456出现微核细胞数细胞总数四．实验结果预计结果用蒸馏水处理的豆芽根尖细胞正常。用较高浓度硫酸铜处理的出现微核现象，且随着浓度的升高，微核率变高。结果记录表格：浓度（mmol/l）蒸馏水631.50.750.375出现微核数细胞总数微核率