回顾国际无菌检查法发展历史1925年直接接种(jiēzhòng)法首先使用在英国1932年英国药典推荐使用无菌测试1936年美国药典第十一章首先引用单个培养基的直接接种(jiēzhòng)法1950年美国药典第十六章推荐使用FTG和SB两种培养基分别培养需、厌气菌和真菌1957年美国FDA和MILLIPORE公司介绍膜过滤法用于抗生素无菌测试1963年英国药典63版收载薄膜过滤法无菌测试1965年美国药典引用薄膜过滤法用于非抑菌性药品的无菌测试1971年欧洲药典第二版公布参照薄膜过滤法无菌测试1978年欧洲药典修订版发行公布推荐使用薄膜过滤法无菌测试1988年美国FDA规定：假如第一次无菌检查不符合规定的样品不再复试，这一批次的药品应报废。实际上排除了药品无菌阳性后再测试的机会1998年英国药典1998无菌测试以一次检出为准，取消复试。2000年美国药典24版无菌测试以一次检出为准，取消复试。检视我国历版药典无菌检查法发展历史1953版实验环境仅要求为半无菌操作箱；仅收载一种直接接种法；用一种培养基检查1963版仅一种直接接种法；用三种培养基分别培养细菌和霉菌1977版开始收载薄膜过滤法（简单装置），用二种培养基分别培养细菌和霉菌1985版收载薄膜过滤法限于抗生素样品；用需、厌气菌培养基及霉菌培养基；要求实验环境为紫外线灭菌的无菌室。1990版与85年版相同1995版开始要求对培养基进行灵敏度检查。2000版规定实验环境为100级洁净度；检验数量从2支/瓶增加为6～11支/瓶；明确薄膜过滤法为首选(shǒuxuǎn)方法包括大容量液体样品首次引用、收载全封闭过滤技术。对比国际无菌检查发展历史，我国2000版以前药典无菌检查法因技术和认识的不足，对提高方法捡出率、保证检验结果的准确性、可靠性方面的规定与先进国家(guójiā)药典中的要求严重脱节。2005版无菌检查法取得(qǔdé)长足发展实验环境要求、验证试验、延长培养时间至少为14天、以一次检出为准，取消复试等亮点。是2005年版药典无菌检查法的大步发展，从而使2005年版无菌检查法比历版无菌检查法有了突破性的提高。基本与国际先进药典无菌检查法接轨。2010年版药典无菌检查法的发展，主要是在总结和巩固实施验证试验以来所取得经验及认识的基础上，作两方面的发展：一、附录无菌检查法（一部附录ⅩⅢB）（二部附录ⅪH）（三部附录ⅫA）围绕(wéirào)着保证实验结果的准确性、可靠性作进一步的增、修订。二、品种各论中【无菌】各论化的发展一、附录无菌检查法中的增、修订（一）总则部分（二）培养基部分（三）灵敏度检查部分（四）稀释液、冲洗液部分（五）方法(fāngfǎ)验证部分（六）薄膜过滤法部分（七）培养及观察部分（八）结果判断部分（九）表1、表2和表3（一）总则(zǒngzé)部分新增规定1、“防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。”2、“日常检验还需要对环境进行监控。”3、“无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。（二）培养(péiyǎng)基部分1、删除：硫乙醇酸盐流体培养(péiyǎng)基后括号（用于培养(péiyǎng)好氧菌、厌氧菌）的说明2、删除：改良马丁培养(péiyǎng)基后括号（用于培养(péiyǎng)真菌）的说明3、删除(shānchú)：选择性培养基项下加入适量中和剂或表面活性剂“如对氨基苯甲酸（用于磺胺类供试品）、聚山梨酯80（用于非水溶性供试品）或β-内酰胺酶（用于β-内酰胺类供试品）”等说明。修订为：在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同验证试验。增订：表1常见干扰物的中和剂或灭活方法(见微生物限度检查法中）4、将原排列第6.的0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）修订排列为第4.——按顺序归类培养基1.～4.均为直接(zhíjiē)用于无菌检查的液体培养基。（三）培养基灵敏度检查部分1、在菌液制备(zhìbèi)中，修订黑曲霉的孢子悬液制备(zhìbèi)方法：规定应使用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，洗脱孢子及稀释孢子液，制成每1ml中含孢子数小于100cfu的孢子悬液。删除了：（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）吸出孢子悬液的操作方法2、新增加稀释后的工作用菌液的保存条件和保存期限：菌液制备后“若在室温(shìwēn)下放置，应在2小时内使用，若保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2℃～8℃，在验证过的贮存期内使用。”（四）稀释液、冲洗液及其制备方法部分在原有1.0.1%