第一章生命大分子物质的制备生命大分子物质蛋白质和核酸类物质是本学科的主要研究对象，而它们往往与其他物质结合在一起，或蛋白质和核酸相互组合而一起出现，加之它们含量低、离体后稳定性较差，使得提取分离过程变得困难；尽管如此，制备生命大分子物质的程序还是存在不少共同之处目的第一节材料的选择与处理一、材料的选择是指欲纯化的某种单一的生命大分子物质生物材料的特点材料选择原则（一）动物脏器除脂方法（二）植物组织（三）微生物第二节确立测定方法一、目的要求常用的测定方法（一）光谱法1.吸收光谱法比色法:将待测物与相关试剂或酶的底物作用产生具有特定颜色的物质,通过测定有色物质的A值对待测物定量或测定酶的活性2.荧光法3.浊度法（二）电化学法（三）生物活性检测法（四）免疫分析法几种测定蛋白质和核酸含量的方法第三节细胞的破碎有效成分有的存在于“材料”细胞外，有的存在于细胞内。就原核细胞而言，若有效成分分泌到细胞外（如淀粉酶类、水解酶类），则分离培养液上清，用相应试剂和方法即可提取制备；若有效成分存在于细胞内（如氧化还原酶类），则需破碎细胞，再进行提取但也有例外，如从铜绿假单胞菌中提取ALP时，可不破细胞，用0.2mol/LMgCl2的0.01mol/LTris-HCl缓冲液（pH8.4）或0.2mol/LMgCl2的溶液（pH8.4）进行抽提（提取酶蛋白后的细菌细胞，可继续培养）一般动物脏器的细胞膜比较脆弱，极易破碎，往往在组织绞碎或提取时就破坏了，而植物和微生物的细胞壁较牢固，需提前进行专门的破细胞操作常用方法2.组织捣碎器法：捣碎器（8000~10000r/min）处理30~45S,植物和动物细胞可完全破碎，但对微生物需加石英砂才有效；注意必须低温捣碎，以防温度升高引起有效成分变性，因此时间不宜过长——剧烈方法4.压榨法：用高压（高于1000倍以上大气压的压力）迫使几十毫升细胞悬液通过一个小孔（孔径＜细胞直径），使细胞被挤破二、溶胀和自溶三、化学处理四、生物酶降解第四节抽提含义：抽提通常是指用适当的溶剂和方法，从原料中把有效成分分离出来的过程二、影响抽提的因素（二）溶剂的极性和离子强度（三）水解酶几种蛋白酶的抑制剂苯甲基磺酰氟化物（PMSF）在水溶液的半衰期在抽提液中加入2-巯基乙醇(1~5mmol/L)或半胱氨酸(5~20mmol/L)、还原谷胱甘肽和巯基乙酸盐(1~5mmol/L)等还原剂时，就可以防止巯基发生氧化作用，或者延缓某些酶活性的丧失（四）温度（五）搅拌（六）氧化（七）金属离子（八）抽提溶剂的用量第五节浓缩常用的浓缩方法有下面几种一、沉淀法二、吸附法三、超滤法四、透析法五、减压蒸馏法六、冰冻干燥法第六节纯化方案的设计与评价纯化方案的定义一、纯化方案的设计二、纯化方案的评价以从赛氏杆菌(Serratiasp．)提取L-门冬酰胺酶为例，说明纯化方案与纯化倍数和收得率的关系第七节有效成分纯度和性质的分析第二节确立测定方法一、目的要求（三）生物活性检测法常用方法二、溶胀和自溶含义：抽提通常是指用适当的溶剂和方法，从原料中把有效成分分离出来的过程（二）溶剂的极性和离子强度（三）水解酶