噬菌体载体phagevectors.ppt
上传人:天马****23 上传时间:2024-09-11 格式:PPT 页数:25 大小:3.5MB 金币:10 举报 版权申诉
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噬菌体简介噬菌体或病毒的DNA能被开发成为基因工程的有用载体,因为:1.高效率的感染性能使外源基因高效导入受体细胞;2.自主复制繁殖性能使外源基因在受体细胞中高效扩增。大肠杆菌的λ-噬菌体48.5kbλ噬菌体基因大致分为3个区:3、感染周期(溶菌循环)头部包装蛋白首先结合在cos区的附近,形成包装启动复合物,A蛋白切割cos位点。4、溶源状态的建立噬菌体基因组可以整合到大肠杆菌染色体DNA上,成为原噬菌体。适当条件下,原噬菌体又可以脱离寄主染色体,重新变成独立的复制子,这种过程叫做原噬菌体的删除作用。噬菌体的溶源和裂解λ-DNA载体的构建插入型载体、取代型载体插入型载体(insertionvector)取代型载体(substitutionvector)插入型载体只能承受较小分子量(一般在10kb以内)的外源DNA片段的插入,广泛应用于cDNA及小片段DNA的克隆。删除重复的酶切位点:野生型λDNA链上有5个EcoRI位点和7个HindIII位点,不利于重组操作,必须删除至1-2个.为了便于各种来源的DNA片段的克隆,还需要增加一些单一的酶切位点.3、灭活某些与裂解周期有关的基因4、加装选择标记(1)免疫功能失活标记(cI筛选)(2)加装选择标记lacZ(蓝白斑筛选)5、建立-噬菌体的体外包装系统(三)λ-DNA作为载体的优点