增殖细胞核抗原在星形细胞瘤中的表达及与病理分级关系（完整版）实用资料(可以直接使用，可编辑完整版实用资料，欢迎下载）增殖细胞核抗原在星形细胞瘤中的表达及与病理分级关系关键词脑肿瘤增殖细胞核抗原星形细胞瘤作为颅内原发性恶性肿瘤，现代诊治技术尚未能对其治疗取得突破性进展，绝大多数病人预后险恶。肿瘤组织病理学分级虽与其生物学行为有一定关系，但由于较多因素的影响，不能准确、客观反映肿瘤细胞的增殖程度以及病人的预后。近十年来，各种细胞动力学研究已用于脑肿瘤的增殖研究，尤其是免疫组织化学技术的日趋成熟，用这种方法研究脑肿瘤细胞增殖，具有可保留细胞和组织结构的完整，方法易行，获得结果快，可用于石蜡切片等优点，因而临床研究者乐于采用。本研究采用ABC免疫组化方法，对我院手术切除的颅内幕上星形细胞瘤石蜡包埋标本的PCNA检测，结合临床资料进行回顾性研究，以探讨PCNA表达与组织病理分级及术后生存的关系。材料与方法一、病例选择1993年1月～1995年12月，上海第二医科大学附属仁济医院神经外科共手术切除颅内幕上星形细胞瘤79例，其中38例因下列原因未进入本研究：(1)临床资料不完整；(2)术后1月内死亡；(3)因肿瘤复发而再次手术；(4)初访即失访。其余41例临床资料完整并获随访，随访截止期为1996年12月31日，各年度病例数分别为，1993年14例，1994年14例，1995年13例。病例中包括男性27例，年龄45.0±15.0岁，女性14例，年龄42.4±12.0岁，男女之比为1.93∶1。二、组织病理学分类根据WHO中枢神经系统肿瘤分类法(1993年)［1］的原则进行分类。资料中包括毛细胞型星形细胞瘤(PilocyticAstrocytoma)13例(WHOGradeI)，纤维型星形细胞瘤(FibrillarAstrocytoma)16例(WHOGradeII)，分化不良型星形细胞瘤(AnaplasticAstrocytoma)9例(WHOGradeⅢ)，多形性胶质母细胞瘤(GlioblastomaMultiforme)3例(WHOGradeⅣ)。肿瘤组织病理学分类及有关临床资料总结见表1。表141例幕上星形细胞瘤临床资料肿瘤类型病例数(例)年龄范围(岁)平均年龄(岁)各级总数4110～7244.1男2710～7245.0女1415～6242.4I级1310～5739.7男710～5743.1女615～4435.7II级1611～7244.5男1211～7244.1女434～6245.8Ⅲ级915～6147.2男615～6148.0女333～5545.7Ⅳ级348～5952.0男258～4948.5女15959.0三、标本准备标本系本院病理科存档保存的石蜡包埋组织块，重新作4μm切片，备染。四、免疫组织化学染色PCNA单克隆抗体PC10为DM公司产品，SAB药盒为Vector公司产品。主要步骤：石蜡切片常规脱蜡，加用1∶40PC10作为一抗，按ABC法作免疫组化反应［5］，光镜下控制DAB显色，苏木素复染、常规脱水、透明、封片。每次实验均设阴性对照，以PBS代替一抗，结果显示阴性。五、判断标准染色后切片在100～400倍光镜下观察，选择5个细胞较丰富的高倍视野作为计数单位，观察的细胞数一般在400～1200间，计数阳性细胞数及阳性细胞数占细胞总数的百分比。视野中坏死细胞、血管内皮细胞以及无法辨认细胞核的细胞不包括在计数范围。阳性反应为细胞核内呈现棕黄色颗粒，阴性反应为细胞核内无棕黄色颗粒。阳性测定以细胞阳性率和细胞阳性强度两个指标相加而定。根据阳性率评分，分别为0分(0%)、1分(＜20%)、2分(20%～50%)、3分(50%～80%)和4分(＞80%)；根据阳性强度即染色深浅评分，分别为0分(无显色)、1分(显浅色)、2分(中等显色)和3分(显深色)。两个得分相加，0分为阴性“-”、2分为“+”、3～4分为“++”、5～7分为“+++”。六、统计方法PCNA表达与不同组织病理分级间关系作Ridit检验，不同组织病理分级及PCNA表达与病人术后生存间关系作Logrank检验。结果一、PCNA表达与组织病理分级的关系PCNA阳性呈现为核内棕色颗粒或均一棕色。各级星形细胞瘤PCNA表达情况见表2。Ridit分析表明，I级与II级间有显著差别(P＜0.05)，I级与Ⅲ级、Ⅳ级间有极显著差别(P＜0.001)，II级与Ⅲ级、Ⅳ级间有显著差别(P＜0.05)，Ⅲ级与Ⅳ级间差别无显著性(P＞0.05)。PCNA表达最高为Ⅳ级，其次为Ⅲ级、II级和I级(见1)。等级相关分析表明，星形细胞瘤PCNA表达与组织病理分级呈正相关(rs=0.74053，P＜0.001)。二、生存期评估41例星形细胞瘤术后中位生存期(MedianSurv