食品安呈与籀溺食品科技ＦＯＯＤＳＣＩＥＮＣＥＡＮＤＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ２００８年第３３卷第１２期ＰＣＲ方法在区分牛奶牧场来源中的应用徐仙‘，陈沁ｐ。（１．上海大学生命科学学院，上海２００４４４；雍克岚１．韩奕奕２２．光明食品集团有限公司，上海２０００４０）摘要：以光明集团提供的采自８个牧场的牛奶为材料，提取ＤＮＡ，利用ＰＣＲ技术区分不同来源的牛奶是否有差异。ＰＣＲ结果表明同一牧场不同天数的扩增条带基本一致；同一牧场不同引物的ＰＣＲ扩增结果存在差异；同一引物不同牧场的ＰＣＲ扩增结果有差异，主要表现在泳带数不同，强弱带的分子量也不一样，据此可以区分不同来源的牛奶。关键词：ＰＣＲ扩增；牛奶；随机引物中图分类号：ＴＳ２５２．７文献标志码：Ａ文章编号：１００５—９９８９（２００８）１２—０２５８—０４ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＰＣＲｉｎａｎａｌｙｚｉｎｇｆａｒｍｓｏｕｒｃｅｓＸＵｘｉ且ｎ’ＣＨＥＮＯｎ”，ＹＯＮＧＫｅ－ｌａｎ’，ＨＡＮＹｉ—Ｙｉ２（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈａｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４４４；２．ＢｒｉｇｈｔＦｏｏｄＧｒｏｕｐＣｏ．ＬＴＤ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００４０）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＤＮＡｏｆｍｉｌｋｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍ８ｆａｒｍｓｏｆＢｒｉｇｈｔＦｏｏｄＧｒｏｕｐＣｏ．Ｌ－ＴＤｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｉｒｆａｒｍｓｏｕｒｃｅｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＰＣＲｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍｅｓｏｆｔｈｅｓａｍｅｆａｒｍｗｅｒｅｓｉｍｉｌａｒ．Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｗｉｔｈｅａｃｈｏｔｈｅｒａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｎｄｏｍｐｒｉｍｅｒｓ．Ｆｉｎａｌｌｙ，５ｆａｒｍｓｃｏｕｌｄｂｅｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｅｄｆｒｏｍｅａｃｈｏｔｈｅｒｂｙｓｔｕｄｙｉｎｇｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｎｔｈｅｎｕｍｂｅｍ．ｔｈｅｃｈｒｏｍａａｎｄｔｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆｂｏｎｄｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｍｉｌｋ；ＲＡＰＤ，牛奶营养丰富、容易消化吸收，是理想的天然食品１１Ｉ。但不少不法分子在经济利益的推动下制假造假，严重危害了消费者的健康，也危害了相关企业的利益及形象．因此严格控制牛奶来源极为重要。近年有报道用毛细管电泳、双向电泳、ＨＰＬＣ、ＥＬＩＳＡ等技术方面来检测牛奶来源，但上述方法都以测定蛋白质为主，而牛奶蛋白在加工处理时易变性１２－６１。ＰＣＲ技术的出现为其提供了有效的解决方法。反刍动物在挤奶过程中会有大量的体细胞脱落（主要为白细胞）使得从牛奶中提取ＤＮＡ成为可能１７“ｏＩ。Ｌｏｐｅｚ—Ｃａｌｌｅｊａ等运用ＰＣＲ技术来检测野水牛奶和意大利干乳酪中是否掺有奶牛的奶，他们还将其运用于检测绵羊奶乳酪中是否掺有山羊的奶ｆ１１－１２１。鉴于此本研究试图以牛奶中提取的ＤＮＡ为材料。进行ＰＣＲ扩增，为准确地检测牛奶来源提供理论依据。１材料与方法１．１材料收穑日期：２００８－０５．０８‘通讯作者作者简介：徐仙（１９８５－－），女。上海人，硕士研究生．主要从事食品分子学研究工作。‘２５８‘矿万方数据２００８年第３３卷第１２期ＦＯＯＤＳＣＩ食ＥＮＣ品ＥＡＮ科Ｄ７Ｅ．底，２ＯＬＯＧＹ’朝鳇与趁溺Ｈ～昆丽殳±司肥羽光明集团提供的采自德林、平龙、闵峰、天华、沙庙、六灶、友谊、大团８个牧场的生牛奶。，实验所用引物均为上海生工合成，序列如表ｌ所示。表１引物序列ＧＧＴＣＧＧＡＧＡＡＴｃＧＧＡＣＧＴＣＡＡＧＡＣＣＴＣＣＡＣＡＣＧＣＡ７Ｉ℃ＧＣＡＧＡＡＡＣＡＣＣＣＣ‘ｒＧＴＡＣＣＴＣＡＧＣ下ｒＣＣＧＣＡＧＴＧＡＣＧＣＣＡＣＡＣＡＣＣＡＧＧ‘ＩＴＧＧ１．２方法１．２．１牛奶ＤＮＡ的提取１１３１（１）将牛奶样品分别置入５０ｍＬ的离心管中，４ｏＣ、２０００ｄｒａｉｎ离心１０ｒａｉｎ，弃上清，用酒精棉球小心擦去管壁上的乳蛋白、乳脂；（２１ｉ０ｍＬＰＢＳ重新悬浮，轻轻振荡，重复操作１的离心擦拭步骤；（３）４℃、１００００ｇ离心１ｒａｉｎ，加入４４０／ＪＬ＂ｒＥＮ（１ｍＬｌｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ＋Ｏ．２ｍＬ０．５ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ＋Ｏ．５８４４ｇＮａＣｌ定容至１００ｍＬ）和６０仙Ｌ０．２ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ，剧烈振荡，直到沉淀完全悬浮，取