第二节放射免疫分析一、基本原理二、实验方法及测定第三节免疫放射分析一、基本原理二、IRMA与RIA的比较免疫技术：以抗原-抗体反应原理为基础，对样品中相应抗原或抗体进行检测。标记技术：将可被探测的示踪物质用化学方法与化合物连接。标记免疫分析：用可微量或超微量检测的示踪剂标记抗原、抗体，检测免疫反应结果并确定待检物。第一节放射免疫技术早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应原理的放射免疫分析(RIA)，稍后又发展了非竞争性结合的免疫放射分析(IRMA)。该类技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析，对相关学科的发展起到了极大地推动作用。放射免疫RIA以标记抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体来测定待检样品中抗原量。二、放射免疫技术－常用的放射性核素125碘-标记物的制备－标记间接标记法125碘-标记物的制备－纯化125碘-标记物的制备－鉴定比放射单位化学量标记物中所含的放射性强度单位：Ci/gmCi/mgCi/mmol比放射性过高，将影响标记物免疫活性比放射性－计算法自身置换曲线反应系统：限量Ab和递增剂量(cpm)的标记抗原标记抗原的结合率(B/T%)随标记抗原总量的增加而减少两条曲线平行,若标记抗原与标准品抗原具有相同的免疫活性比放射性－自身置换法四、放射免疫技术－抗血清鉴定放射免疫技术－抗血清鉴定五、方法学评价第二节放射免疫分析一、放射免疫分析－基本原理Ab限量，Ag*定量,Ag*和Ag的量大于Ab结合位点，二者通过竞争方式与Ab结合；随着Ag增加，Ag*与Ab结合形成Ag*Ab复合物的放射量降低,二者变化成函数关系。以未结合的Ag*为F，Ag*Ab复合物为B，则B/F或B/(B＋F)与Ag的量变存在着函数关系－剂量反应曲线二、放射免疫分析－实验方法及测定分离结合、游离标记物测量、数据处理第三节免疫放射分析一、免疫放射分析－基本原理单位点IRMA双位点IRMA二、IRMA与RIA比较放射免疫分析技术的灵敏度高、特异性强、精密度好,常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定。但由于放射污染和危害，常用核素半衰期短，试剂盒稳定期不长等诸多不足,RIA将逐渐被取代。1.放射免疫技术的核心是什么？2.制备放射性125I标记物的基本原理是什么？有哪些方法？3.评价125I标记物质量的指标有哪些？4.用于放射免疫技术的抗体应满足哪些质量标准？5.放免分析中标记/未标记抗原、抗体的用量特点及与免疫复合物的量变关系？6.反应结束后，如何将免疫复合物与游离标记物分离开？7.放射免疫分析实验中，如何确定待测抗原的含量？8.免疫放射分析与放射免疫分析的反应原理有何不同？9.γ闪烁计数器记录的信号即是放射核素的衰变吗？10.灵敏度、特异性和测定范围，免疫放射分析与放射免疫分析有何区别？放射免疫技术的基本原理是放射性核素可探测的灵敏性、精确性与抗原抗体反应的特异性相结合，主要包括RIA和IRMA。RIA所用的标记物应具备高比活度、高纯度和完整的免疫活性；抗血清应具有较高的抗体亲和力、高度的特异性和适宜的工作滴度；标准品浓度需按标准进行标定；结合与游离反应物的分离（二抗法、PEG法、PR试剂法和固相法）应彻底、迅速、不影响反应平衡、非特异性低和操作简便。拟合标准曲线需根据不同检测项目和不同的要求选用恰当的反应参数。