酶是具有催化活性的蛋白质酶学研究是现代分子生物学不可缺少的内容。酶学研究的意义表现在第一节基本概念二、酶的比活力指每毫克蛋白中含有的酶活力单位数，用IU(U)/mg表示。酶的比活力是酶浓度和酶质量的衡量标准三、酶的转换常数①分子活性：每摩尔酶分子、每分钟转换底物的摩尔数②催化中心活性：每摩尔活性亚基或催化中心每分钟转换底物的摩尔数四、KmKm是酶活性部位的一半被底物占据或酶反应达到最大反应速度一半时所需要的底物浓度，是一定温度下酶的特征常数，又称米氏常数。同一酶的不同底物有不同的Km。1/Km表示酶底亲和常数，1/Km愈大，则亲和力愈大五、V及VmV是反应速度。指单位时间内(如1分钟)每毫克酶蛋白转换底物的μmol数Vm表示在一定酶浓度和反应条件下的最大反应速度，是底物浓度足够大时，酶反应速度趋向的极限值影响因素包括有酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等。一、底物浓度对反应速度的影响当底物浓度高达一定程度（一）米－曼氏方程式（二）Km与Vmax的意义Vmax定义：Vm是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度成正比。（三）Ｋm值与Ｖmax值的测定二、酶浓度对反应速度的影响双重影响温度升高，酶促反应速度升高；由于酶的本质是蛋白质，温度升高，可引起酶的变性，从而反应速度降低。四、pH对反应速度的影响二、酶活力的测定方法(二)酶的测活方法1．静态法：在一定条件下将酶和底物作用一定时间后终止反应，然后直接或间接地检测底物的减少(或产物的增加)量，从而计算出酶的活力此法测活的关键步骤是反应多长时间后终止反应为解决这一问题，首先应在较高酶浓度下启动反应(曲线3)，于不同的反应时间终止反应，然后作出产物浓度一时间曲线找出产物随时间线性增加的最长时间t。在正式测活中，选用低于此酶量的样品，反应到t。(或小于t。)时终止反应即可得到正确的酶活性2．半动态法于不同时间分别从反应体系中取出一定量的样品，迅速置于反应终止液中，然后通过检测并计算反应后不同时间样品中的底物减少量(或产物增加量)，从而计算出反应速度。本实验中的时间点间隔根据实验确定。一般是酶活性高，时间间隔短；酶活性低，间隔可适当延长。选用的时间点一般以3～5点为宜3．动态法该法连续监测酶反应进行的程度，同时记录不同时间点产物生成(或底物减少)量，然后计算出单位时间内产物的增加(或底物的减少)量即酶活力，再计算出其比活力。4.偶联酶法许多反应的底物或产物不能直接被检测两种方法解决：①在反应终止后，加入一种新的物质，其可以和产物(或底物)反应，．生成可被检测的物质(如有颜色的物质、荧光物质等)而间接测出产物(底物)的改变量②可将第一步酶反应的产物作为第二步酶反应的底物，通过第二步酶反应生成可检测的产物，通过检测第二步反应产物的变化计算出第一步底物(或产物)的改变量，从而计算出催化第一步反应的酶活力此法即为偶联法。第三节同工酶的测活三、选择性底物法不同的同工酶对某些底物的选择可能具有特异性四、柱层析法将同工酶一一分离测其活力五、电泳法六、免疫法抗体可以和特定的同工酶结合而抑制或沉淀该同工酶第四节Km及Vm的测定将方程两边取倒数如果固定酶和其中一个底物的量，在另一底物不同浓度下测活，得到酶反应速度，用双倒数作图，则很容易求出酶对该底物的Vm及Km。选择使用底物时1．应选择V-[S]曲线中的线性部分对应的底物浓度。2．由于是双倒数作图，故选择[S]时，最好选用1／[S]呈常数递增的数值，3．理论上分析，[S]≈Km时，测定Km及Vm最准确，