目的原理材料與儀器步驟與方法實驗注意事項實驗結果目的總生菌數是指食品在經過處理，並於一定條件下進行培養後，所得1g或1ml檢測樣本中所含的活細菌總數。總生菌數的測定除了可作為判別食品被汙染的程度，也可應用此一測定方法觀察細菌在食品中繁殖的情形，以便對被檢測之樣品進行衛生之評價時提供依據。本實驗是利用稀釋之方法讓學生學習並掌握總生菌計數之檢測。原理微生物的生長指的為其細胞數目的增加，而一般要測定樣品中的總菌數通常以測定容量(ml)或重量(g)單位中微生物的數量來表示，但由於細菌本身數量很龐大，故通常只取一小部分的樣本，再藉由一系列的稀釋使菌落在培養基上生長數目介於25-250colonyformingunit(CFU)之間，此即為利用稀釋方測定總菌數之原理所在。材料與儀器材料設備儀器及其他用具材料BacteriaEscherichiacoli事先稀釋至10-3磷酸緩衝液(Butterfield’sphosphatebuffer,BPB,pH7.2)胰化酪蛋白大豆洋菜培養基Trypticsoyagar(TSA)6plates/group胰化酪蛋白大豆洋菜培養液Trypticsoybroth(TSB)設備儀器及其他用具無菌培養皿恆溫培養箱酒精燈滅菌加蓋玻璃試管血清瓶滅菌燒杯攪拌器步驟與方法食物樣品調製：液體樣品以磷酸緩衝液或生理食鹽水定量稀釋；固體樣品則先以無菌水或生理食鹽水稀釋再以果汁機打碎均勻，即為原液（如50ml的液體或固體樣品置於450mL之無菌水中，做成10倍稀釋之樣品液,250g+225mL）。細菌培養液:直接取1mL(一般在隔夜培養後，E.coli菌量應在109CFU/mL以上)十倍序列稀釋(decimallyserialdilution)Spreadplate將適當濃度的稀釋液，滴0.1mL于培養基中央。實際稀釋濃度為-7、-8、與-9。2plates/dilution(理論上10plates/dilution最佳)將玻棒置於70%的酒精中，將玻棒拿出後至於酒精燈上。將玻棒至於培養基的角落，冷卻之。將菌液均勻塗抹在培養基上。靜置3-5分鐘後，放置於37℃恆溫培養箱中倒置培養24小時。以菌落計數器計算菌落總數。選取菌落數在25-250之間的培養皿作為菌落總數測定的參考標準）。混稀法PourplateColonycounting實驗結果總生菌數(CFU/g)的計算以稀釋法測定出之細菌數，可以以下公式計算出其總生菌數：菌數計算實驗注意事項進行稀釋步驟時須確認樣品已搖晃均勻。不可以使用一般蒸餾水(或無菌水)當做稀釋液。常用稀釋液生理食鹽水saline磷酸緩衝液Butterfield’sphosphatebuffer(BPB,pH7.2)磷酸緩衝生理食鹽水phosphatebuffersaline(PBS,pH7.4)例1：液體樣品每毫升樣品中計數之培養皿菌落數(n)為232個；稀釋倍數(d)為103倍，則此樣品中總生菌數目為：232×1,000＝2.32×105CFU/mL;5.37logCFU/mL例2：固體樣品每毫升樣品中計數之培養皿菌落數(n)為232個；稀釋倍數(d)為103倍，則此樣品中總生菌數目為：232×1,000＝2.32×105CFU/mL2.32×105x10=2.32×106CFU/g6.37logCFU/g