DNA的粗提取与鉴定蛋白质二苯胺3.DNA粗提取实验材料和方法的选择。(1)不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。(2)材料不同所采用的提取方法不同。①植物组织：取材→研磨→过滤→沉淀。②鸡血：制备鸡血细胞液→提取核DNA→溶解细胞核内DNA→析出并滤取DNA→DNA再溶解→提取较纯净的DNA。4．DNA的析出与鉴定。(1)析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液等体积的冷却酒精溶液(体积分数为95%)静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物(此即粗提取的DNA)，且玻璃棒沿一个方向搅拌卷起丝状物。(2)鉴定：♨特别提醒：1.不能正确区分动植物细胞获取含DNA滤液的原理和方法。(1)动植物细胞获取含DNA滤液的原理和方法。(2)实验中2次加蒸馏水、3次加氯化钠溶液和6次搅拌的作用。①2次加蒸馏水：第一次是在第一步，加水是为了使血细胞吸水膨胀破裂，加水后必须充分搅拌，使血细胞充分破裂；第二次加蒸馏水是在第三步，是为了稀释氯化钠溶液。②3次加氯化钠溶液：第一次加氯化钠后，必须充分晃动烧杯，使二者混合均匀，加速染色质中DNA与蛋白质分离，使DNA充分游离并溶解在氯化钠溶液中。第二次加氯化钠溶液是为了DNA的再溶解，这时溶液中的蛋白质含量已很少。第三次加氯化钠溶液是为了再次溶解DNA。③6次搅拌：除最后一次搅拌外，前5次搅拌均要朝一个方向。并且，在析出DNA、DNA再溶解和提取中，各步搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，防止DNA分子断裂。2．高考命题角度。(1)原料、试剂角度：考查提取DNA的原料、试剂和方法。(2)操作流程：考查DNA提取的操作过程及注意事项。【例1】在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述中正确的是()A．用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14mol/L，滤去析出物B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质C．将丝状物溶解在2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色D．用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同解析：用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14mol/L时，滤取析出物；将丝状物溶解在2mol/L的NaCl中，加入二苯胺试剂，需沸水浴加热几分钟，才呈蓝色；用菜花替代鸡血为实验材料，需要对材料的细胞壁进行处理。调节NaCl溶液浓度改变不同物质在其中的溶解度，加入木瓜蛋白酶分解蛋白质都可以去除部分杂质，故B正确。答案：B跟踪训练A．①是洗涤红细胞，去除红细胞表面的杂质B．②是稀释NaCl溶液至0.14mol/L，析出DNAC．③是选用2mol/LNaCl溶液，溶解黏稠物中的DNAD．④是纯化DNA，去除溶于95%酒精的杂质PCR技术的基本操作和应用(2)复性：温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图：(3)延伸：温度上升到72℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如下图：♨特别提醒：(1)DNA分子复制的人工控制。①解开螺旋：在80～100℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。②恢复螺旋：在50℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。③复制条件：缓冲液、DNA模板、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶和两种引物。④反应场所：PCR仪。(2)PCR技术中的引物：①含义：引物是一小段单链DNA或RNA分子。②作用：为DNA聚合酶提供合成的3′端起点。③种类：扩增一个DNA分子需要2种引物。④数目：引物数目等于新合成的DNA子链数目。⑤与DNA母链的关系：两种引物分别与DNA母链的3′端通过碱基互补配对结合。【例2】多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历三十多次下述循环：95℃条件下使模板DNA变性、解链→55℃条件下复性(引物与DNA模板链结合)→72℃条件下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述，不正确的是()A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、4种核糖核苷酸D．PCR与细胞内DNA复制相比,其所需要酶的最适温度较高解析:PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸。DNA变性(90～95℃)：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。复性(55～65℃)：系统温度降低，引物与DN