结核病细菌学检验(jiǎnyàn)的标准化与新诊断技术进展强化(qiánghuà)结核病实验室诊断标准化的必要性第三页，共七十四页。分类(fēnlèi)结核(jiéhé)分枝杆菌特点结核病细菌学检查的重要(zhòngyào)作用细菌学检验存在(cúnzài)的问题主要(zhǔyào)的细菌学检验技术标准(biāozhǔn)的痰涂片抗酸染色、镜检技术痰标本(biāoběn)的采集、保存和运送标本(biāoběn)的采集如何(rúhé)正确留痰直接(zhíjiē)痰涂片检查法细菌学常规(chángguī)检查—直接涂片法载玻片染色(rǎnsè)（一）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜头直接接触玻片上的痰膜。（二）仔细观察300以上的视野。（三）每个工作日，一名镜检人员的玻片阅读量一般不应超过25张。（四）连续(liánxù)阅读10～12张玻片后，应休息20分钟左右。细菌学常规(chángguī)检查—直接涂片法细菌学常规检查—直接(zhíjiē)涂片法细菌学常规检查(jiǎnchá)—直接涂片法细菌学常规(chángguī)检查—直接涂片法涂片镜检质量保证系统(xìtǒng)—室内质控涂片(túpiàn)镜检质量保证系统—室间质控复检玻片样本量复检样本量计算(jìsuàn)表复检样本量计算(jìsuàn)表说明：复检结果(jiēguǒ)评价1.误差分类：分为定性(dìngxìng)误差和定量误差（1）定性误差包括高假阳性和高假阴性高假阳性（HighFalsePositiveHFP）：阴性片被错误地判读为2＋以上的阳性。高假阴性（HighFalseNegativeHFN）：2＋以上的阳性玻片被错误地判读为阴性。（2）定量误差包括量化误差、低假阳性和低假阴性量化误差（QuantificationError，QE）：同一张阳性玻片初检者和复检者阳性判断级别的差异。低假阳性（LowFalsePositive，LFP）：阴性玻片被错误(cuòwù)地判断为1＋及以下的阳性。低假阴性（LowFalseNegative，LFN）：1＋及以下玻片被错误地判断为阴性。常见(chánɡjiàn)“误差”原因实验室诊断(zhěnduàn)的新进展1、现代分子生物学检测(jiǎncè)主要技术（1.1）聚合酶链反应（PCR）实时荧光(yíngguāng)定量PCR实时荧光(yíngguāng)定量PCR（1.2）环介导等温扩增基因(jīyīn)检测(Loopmediatedisothermalamplification，LAMP)PurificationforUltraRapidExtraction(PURE)LAMP检测(jiǎncè)LAMP敏感度LAMP结果(jiēguǒ)分析（1.3）、分子(fēnzǐ)线性探针（Hain技术）GenoType®分支(fēnzhī)杆菌试剂盒系列技术设备自动操作(cāozuò)-全自动杂交仪GenoTypeMTBDRplus结果(jiēguǒ)适用于培养物和痰液。检测快速，对于直接采集的样本或阳性培养物在数小时后内即可完成检测；检测INH单耐药型TB、MDR和XDR；符合(fúhé)WHO推荐的线性探针分析标准。验证(yànzhèng)数据结论(jiélùn)（1.4）、基因芯片(jīyīnxīnpiàn)技术什么(shénme)是基因芯片基因芯片技术(jìshù)的主要特点博奥分枝杆菌菌种鉴定(jiàndìng)试剂盒(DNA微阵列芯片法)芯片(xīnpiàn)扫描结果1临床(línchuánɡ)验证（1.5）GeneXpertMTB/RIF快速诊断(zhěnduàn)技术GeneXpert最大程度简化(jiǎnhuà)TB检测！！！XpertMTB/RIF检测(jiǎncè)操作步骤“Samplein.Answerout.”研究人数>1,700Patients•秘鲁、南非、阿塞拜疆(āsāibàijiānɡ)、印度结论(jiélùn)现代免疫学诊断(zhěnduàn)技术体液(tǐyè)免疫学诊断技术的意义2、细胞(xìbāo)免疫学诊断技术酶联免疫斑点(ELISpot)技术是检测细胞(xìbāo)分泌细胞(xìbāo)因子的一种实验方法，采用可定量的夹心ELISA方法，利用结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6&CFP-10刺激和激活免疫活性细胞(xìbāo)使其产生IFN-，并检测IFN-的浓度变化进行诊断的方法。通过ELISpot酶联斑点分析系统对加底物后形成的斑点分析后得出结果。ELISpot具有较高的特异性和敏感性。ELISPOT技术(jìshù)原理ELISPOT在结核病诊断(zhěnduàn)中的应用ELISPOT早期技术评估英国Ewer等用ELISpot检测