免疫药实验方法药理实验方法学研究生234EmilvonBehring1854-1917,NobelPrizein1901fordemonstratingthatcirculatingantitoxinsagainstdiphtheria（白喉）andtetanus（破伤风）toxinsconferredimmunity.EdwardJenner1749-1822Successfulvaccinationagainstsmallpox（天花）7●现代免疫学时期ClonalSelectionTheory（Burnet学说,1960年诺贝尔奖）体内存有能识别各种抗原的细胞克隆(clone)，每一细胞表面均有对特定抗原的受体，能与相应抗原结合而识别它们。抗原的作用在于选择与其相应的细胞克隆与其受体结合后，引起细胞的增殖分化，产生免疫应答。胎生期免疫细胞与自己抗原相接触形成天然自身耐受状态（禁忌细胞系）免疫细胞系可突变产生与自己抗原发生反应的细胞系可形成自身免疫反应此学说对免疫学中的根本问题——自我识别有了比较满意的解释，对免疫学中的其他重要问题，诸如免疫记忆、免疫耐受性、自身免疫性等现象也能作出恰当的说明，因此被人们广为接受，成为现代免疫学的理论基础。1011121314151718192021（2）取细胞悬液1ml，置聚乙烯小管中，加入10-4M鲁米诺200ml，将小管放入液闪测量瓶中，测定发光6秒钟，作为本底。Con-A（刀豆球蛋白）――刺激T细胞（1）取18～22g小鼠，雌雄各半，随机分组。直接溶血空斑试验:测定产生IgM型抗体的细胞。1溶血空斑试验（haemolyticplaqueassay，HPA）病原菌的发现与疫苗使用的推广MTT进入细胞后作为反应底物，被氧化成蓝色的甲臜（formazan），存积于细胞内及周围，加入DMSO，使细胞破裂，并使细胞内甲臜释放出来，测定OD490nm。①免疫抑制剂造模（如环磷酰胺、氢化可的松、环孢霉素A）19世纪中叶，显微镜的改进使人们可在镜下直接观察到细菌，导致病原菌的发现。网状内皮系统（RES）是机体最主要的防御系统，具有强大而迅速的吞噬廓清异体颗粒或某些可溶性异物的能力，并能迅速清除体内自身产生的某些有害物质。Depression（3）中药粗制剂中影响因素较多，注意假阳性。ELISA（EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay）按发病机制不同,免疫性疾病分为：●免疫增强药：胸腺素、卡介苗、干扰素（免疫调节）、左旋咪唑等。5ml，置45℃恒温水浴保温。当静脉注入特定大小的惰性颗粒后，它即可被RES细胞迅速吞噬而从血流中廓清，因此，可借助测定血流中炭粒的消失速度来反映RES吞噬异物的能力。一、影响非特异性免疫功能实验232425超敏反应性疾病廓清指数K＝＝1ml，其他步骤相同。(3)免疫细胞治疗经SRBC免疫动物的淋巴细胞可产生抗SRBC抗体（溶血素），并释放至外周血。基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。（4）终止前6h，每孔加入3H-TdR1ml，使其终浓度为1～5μci/ml。（1）用HBSS将Mφ调整至2×106个/ml的细胞悬液备用。即校正廓清指数5ml、10％补体1ml，置37℃水浴30min，然后移至冰浴中终止反应，1500rpm离心5min，取上清1ml，加都氏液3ml，摇匀放置10min，测OD540nm。ClonalSelectionTheoryMφ具有强大的吞噬能力，鸡红细胞对鼠类是一种较强的抗原性异物，当其被注入小鼠腹腔后，可引起腹腔Mφ聚集并吞噬，注入定量鸡红细胞（CRBC），隔一定时间后，吸取腹腔Mφ，镜检其吞噬活性，并以吞噬百分率及吞噬指数的高低表示Mφ吞噬能力的大小。（2）免疫功能低下的动物模型（肿瘤、衰老、慢性病均可造成免疫功能低下）（1）DNFB溶液要临用前新鲜配制。免疫耐受现象的发现PFC是一种体外检测单个抗体形成细胞（浆细胞）的方法。用Alsever’s液保存的SRBC可使用2周。2728293031323334353637383940414243444546474849505152535556575859606162636465666768697172737475小结一、影响非特异性免疫功能实验（一）碳粒廓清法/吞噬鸡红细胞法/化学发光测定法(巨噬细胞)（二）溶菌酶测定法（三）硝类兰四氮唑（NBT）还原试验(中性粒细胞)（四）NK细胞活性检测,LDH法二、影响体液免疫功能的实验方法（一）血清溶血素测定法（二）抗体形成细胞测定法（PFC）（三）抗体水平的检测三、影响细胞免疫功能的实验方法（一）淋巴细胞转化试验（二）DTH反