培养基配方：(1)培养基的配制：先将试管贴好标签。注明培养基名称，组别，日期。标签粘贴位置在离管口1/3管身处。注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。操作图示：(2)高压蒸汽灭菌一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～30min实验步骤：摆斜面倒平板将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1ml的菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至50℃左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15ml，摇匀，凝固，制成平板。2.器皿的清洗包装及干热灭菌(2)干热灭菌法所需温度(160-170℃)，时间长(1-2h)。实验步骤:(1)写标签：在皿底上(2)接种环境或体表微生物手指（洗前后）、头发、咳嗽、抹布、空气、硬币等(3)培养：37℃培养24h-48h常用的几种方法如下：斜面接种液体接种平板接种1)斜面接种示意图2)平板划线法：将菌液分离样品摇匀，以无菌操作用接种环直接取试管中待分离纯化的菌液，将接种环通过稍打开皿盖的缝隙（约30℃）伸入平板，将菌液点种在平板边缘一处，取出接种环，烧去多余的菌种，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却,然后从接种有菌的部位在平板上自左向右轻轻划线，划线时平板面与接种环面成30-40℃，以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线,接种环不要嵌入培养基内划破培养基,线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖.灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。1.细菌的单染色2.革兰氏染色芽孢染色4.酵母菌形态观察、死活细胞鉴别现场演示1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。显微镜操作（1）初染：于制片上滴加结晶紫染液，染1min后，用水洗去剩余染料。（2）滴加卢戈氏碘液，1min后水洗：（3）滴加95％乙醇脱色，摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止(根据涂片之厚薄需时30s至1min)。（4）复染滴加石炭酸复红液复染1min，水洗。（5）用滤纸吸干，油镜镜检。3.芽孢染色法(1)取37℃培养18～24h的枯草芽孢杆菌作涂片，并干燥，固定。(2)于载片上滴入3～5滴5％孔雀绿水溶液。(3)用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计算时间约4～5min。加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料。(4)倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。(5)用0.5％沙黄水溶液(或0.05％碱性复红)复染1min，水洗。(6)制片干燥后用油镜观察。芽孢呈绿色，菌体红色。制片→染色（孔雀绿5min）→水洗→复染（蕃红花红2-3min）→水洗→干燥→镜检在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌苔放入上述液滴里，混合均匀；将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。综合设计实验三