石蜡包埋技术1、熟悉石蜡包埋技术基本过程在显微镜下要观察人体组织，必须将组织切成以微米为单位的薄片，使其透光并易于观察，但直接切取柔软组织是难以办到的。石蜡包埋法是将“支持物质”----石蜡渗入组织内部，为此，必须先将组织中水分除净，用酒精进行脱水(70％→80％→90%→95%→l00％)。再用二甲苯置换出组织中的酒精，使其透明，然后放入融化的石蜡中。将浸蜡的组织块置于包埋框中，冷却后组织块便具有石蜡的硬度，切片机便能将组织切成薄片。操作步骤4.脱水通常多用酒精脱水，为减少组织收缩，脱水酒精的浓度由低浓度开始，逐级升高浓度。60%(1h)→70%(1h)→80%酒精(1h)→90%(1h)→95%(2h)→100%(2h)注意:脱水的具体时间视组织块大小体积与厚度而定。5.透明透明剂常有二甲苯、冬青油等等。6.浸蜡将透明组织移入已熔化的石蜡中，使熔化的石蜡能浸透到组织中，然后包埋成组织蜡块。浸蜡过程在温箱中进行，温度不能超过60oC，温度过高或时间过长，组织容易收缩和脆变。方法：1/2石蜡→石蜡I→石蜡II→石蜡III。7.包埋将组织块和石蜡置于包埋框内，冷却即成蜡块，组织获得了一定硬度和韧度，就可以切成微薄的切片。8.切片载玻片先用蛋白甘油处理；Leica切片机进行切片，厚5μm；45oC漂烘仪内进行展片。9.裱片将蜡片裱贴于载玻片上10.烤片将切片烤干待用Nisslbody染色技术1.熟悉Nisslbody染色原理2.掌握Nisslbody染色操作方法尼氏体由大量粗面内质网和游离核糖体构成，是神经元合成蛋白质的部位。机体组织是无色的，必须经过染色，增加组织结构的对比度，便于在显微镜下观察鉴别。甲苯胺蓝为碱性染料，可将尼氏体染为紫蓝色。尼氏体形态和数量的观察可作为判定神经元功能状态的一种标志。材料操作步骤2、染色：20~30分钟（600C温箱）染液配制:甲苯胺蓝0.5克50%酒精100毫升染后蒸馏水洗3、分色：95%酒精分色1-2’’，镜下控制4、脱水：100%酒精10’’X25、透明：二甲苯5’X26、封片：用中性树胶进行封片7、观察：结果