RT-PCR原理简介RT-PCR技术中的关键点TIANGEN公司RT产品选择指南RT-PCR原理简介cDNA第一链合成法示意图（两步法）一步法实验示意图（同一个反应管中）适用于mRNA表达量解析TwoStepRT-PCR效率高使用Random和Oligo-dT引物可以制备cDNApoolcDNA可长期保存目的片段在mRNA任何位置都能使用。通常mRNA表达量分析最适。RT-PCR原理简介RT-PCR技术中的关键点TIANGEN公司RT产品选择指南模板：总RNA，mRNA，体外转录的RNA引物：随机引物，OligodT，基因特异性引物(GSP)反转录酶：AMVM-MLVQuantReverseTranscriptase逆转录酶的选择RNaseH的作用分离高质量RNA使用高活性的逆转录酶提高逆转录酶保温温度减少基因组DNA污染RNA降解或起始量少RNA提取后含抑制成分cDNA合成时引物退火不充分PCR失败目的基因在组织中不表达或表达量低问题2：非特异性扩增RNA中有内源或外源DNA污染引物和模板非特异性退火基因特异性引物设计较差形成引物二聚体镁离子浓度太高问题3：弥散cDNA第一链产物的含量过高DNase降解DNA产生的寡核苷酸的非特异性扩增PCR反应中引物过多循环数过多退火温度过低RT-PCR原理简介RT-PCR技术中的关键点TIANGEN公司RT产品选择指南目录号