遗传病基因突变分析（SSCP）7.5lPCR产物2、聚合酶链反应加样（DMD）(P30)实验原理:1）DNA抽提2）聚合酶链反应3）单链构象多态性分析1）DNA抽提核基因组DNA可以从任何有核细胞中提出Agarosegelelectrophoresis双蒸水10*BufferMgCl2dNTPs（ATP/CTP/GTP/TTP）Primer（引物）R+FDNA模板Taq-DNA聚合酶石蜡油变性：95℃,1min退火：温度和引物有关延伸：时间和待扩增产物长度有关72℃forTaqStep1(1个循环)94C5分钟Step2(30个循环)94C30秒59C30秒72C30秒Step3(1个循环)72C5分钟3）单链构象多态性分析单链构象多态性Trp(色氨酸)→Arg(精氨酸)双甲基丙烯酰胺（methylene-bisacylamide，Bis)单体丙烯酰胺（acrylamide，Acr）TEMED：四甲基乙二胺，可以催化过硫酸铵产生自由基，从而加速丙烯酰胺凝胶的聚合10%APS：（过硫酸胺）催化剂H2O银染：利用银离子可与核酸结合的特性，在甲醛作用下银离子还原为Ag，使凝胶中DNA条带显黑色。其操作过程如下：①电泳完的聚丙烯酰胺凝胶用10％的酒精浸泡5分钟。②弃酒精，加入1%HNO33分钟，不停摇动。③弃HNO3液，用双蒸水清洗两次。④加入AgNO3染液，染色10-20分钟。⑤用双蒸水清洗一次。⑥加入显影液，至清淅的DNA单链电泳条带出现为止。最好是先显影，弃预显影液后，第二次再加入显影液，显影至DNA条带出现为止。⑦弃显影液，加入10％的乙酸定影5分钟。⑧弃乙酸，在双蒸水中浸泡5分钟以上。泳道1、3、7、8是正常对照