TheExtraction,SeparationandPurificationofEnzyme酶的提取、分离纯化技术路线酶的组合分离纯化策略酶分离纯化的基本原则酶的纯化过程，约可分为三个阶段：(1)粗蛋白质(crudeprotein):采样→均质打破细胞→抽出全蛋白，多使用盐析沉淀法；可以粗略去除蛋白质以外的物质。(2)部分纯化(partiallypurified):初步的纯化，使用各钟柱层析法。(3)均质酶(homogeneous):目标酶的进一步精制纯化，根据酶分子电荷性质的分离方法大多数蛋白类酶都溶于水，而且在低浓度的盐存在的条件下，酶的溶解度随盐浓度的升高而增加，这称为盐溶现象。酶的提取、分离纯化技术路线定义：利用蛋白质分子对其配体分子特有的识别能力JY92-IID超声波3、细胞破碎方法及其原理离心分离，过滤分离，沉淀分离，层析分离，电泳分离，萃取分离，结晶分离等。酶蛋白作为两性电解质，其结构受pH值的影响TheExtraction,SeparationandPurificationofEnzyme超滤原理的示意图高浓度的中性盐降低蛋白质的溶解度。高盐浓度下盐离子与蛋白质分子争夺水分子，除去蛋白质的水合外壳，降低溶解度而沉淀。酶的纯化过程，约可分为三个阶段：机械破碎酶的提取是指在一定的条件下，用适当的溶剂或溶液处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂或溶液中的过程。也称为酶的抽提。酶提取时首先应根据酶的结构和溶解性质，选择适当的溶剂。一般说来，极性物质易溶于极性溶剂中，非极性物质易溶于非极性的有机溶剂中，酸性物质易溶于碱性溶剂中，碱性物质易溶于酸性溶剂中。有些酶与脂质结合或含有较多的非极性基团，则可用有机溶剂提取。盐提取（改变离子强度）在盐浓度达到某一界限后，酶的溶解度随盐浓度升高而降低，这称为盐析现象。原因：高盐浓度下盐离子与蛋白质分子争夺水分子，除去蛋白质的水合外壳，降低溶解度而沉淀。不同蛋白质分子量、表面电荷不同，在不同盐浓度下沉淀，逐渐增大盐浓度，不同蛋白质先后析出，称分段盐析。B、有机溶剂沉淀（降低介电常数）有机溶剂之所以能使酶沉淀析出。主要是由于有机溶剂的存在会使溶液的介电常数降低盐提取（改变离子强度）2)有机溶剂易燃、易爆，对安全要求较高。有机溶剂之所以能使酶沉淀析出。离心分离，过滤分离，沉淀分离，层析分离，电泳分离，萃取分离，结晶分离等。离心分离，过滤分离，沉淀分离，层析分离，电泳分离，萃取分离，结晶分离等。3、细胞破碎方法及其原理酶的纯化过程，约可分为三个阶段：定义：利用离子交换树脂作为支持物，将带有不同电荷的蛋白质进行分离的方法。酶的纯化过程，约可分为三个阶段：酶的提取、分离纯化技术路线酶的纯化过程，约可分为三个阶段：高浓度的中性盐降低蛋白质的溶解度。1)盐溶（saltingin）：Capacity（容量）高浓度的中性盐降低蛋白质的溶解度。4、利用生物分子专一性结合的5.酶的纯化与精制2）凝胶过滤3）透析与超滤超滤原理的示意图设计分离纯化工艺的基本要求微生物污染及蛋白酶的存在都能是酶被降解破坏降低溶液的介电常数通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎。盐提取（改变离子强度）B、有机溶剂沉淀（降低介电常数）低浓度的中性盐增加蛋白质的溶解度。通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，而达到细胞破碎根据酶分子大小和形状的分离方法酶的纯化过程，约可分为三个阶段：酶蛋白作为两性电解质，其结构受pH值的影响向蛋白质或酶的水溶液中加入中性盐，可产生两种现象：可以粗略去除蛋白质以外的物质。JY92-IID超声波微生物污染及蛋白酶的存在都能是酶被降解破坏(1)粗蛋白质(crudeprotein):采样→均质打破细胞→抽出全蛋白，多使用盐析沉淀法；酶的提取、分离纯化技术路线FLASH2）电泳3）等电聚焦电泳4、利用生物分子专一性结合的分离方法原理：把待纯化的某一蛋白质的特异配体通过适当的化学反应共价的连接到像琼脂糖凝胶一类表面的功能基，当蛋白质混合物加到填有亲和介质的层析柱时，待纯化的某一蛋白质则被吸附在含配体的琼脂糖颗粒表面上时，而其它的蛋白质则因对该配体无特异的结合部位而不被吸附，它们通过洗涤可除去，被特异结合蛋白质可用含游离的相应配体溶液把它从柱上洗脱下来。亲和层析：