专题微生物的培养与应用2一、微生物的实验室培养2.无菌技术3.实验操作4.菌种保藏 即时训练1科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白。这种蛋白质具有极强的抗菌能力,因而受到了研究者的重视。答案:(1)碳源氮源(2)数量(3)平板划线法稀释涂布平板法灭菌二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 即时训练2自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯,然后进行数量的结果分析:(2)一同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上菌落数的平均值为23.4,那么每升样品中的菌落数是(涂布平板时所用的稀释液体积为0.2mL)。(3)多当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察的是一个菌落三、分解纤维素的微生物的分离——纤维素分解菌的筛选 即时训练3有些微生物能合成纤维素酶,通过对这些微生物的研究和作用,使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒(1)培养基中加入的化合物A是,为微生物的生长提供,这种培养基属于培养基。答案:(1)纤维素碳源选择(2)刚果红(3)接种环灼烧稀释涂布平板(4)防止造成环境污染葡萄糖发生这种反应。纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素,从而使菌落周围形成透明圈。(3)获得纯净的菌株有两种方法,即平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线操作时所用的接种环,每次接种之前都要灼烧,这是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。(4)实验结束后,使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉,这样可防止造成环境污染。19考点一微生物的实验室培养1.培养基(2)无菌技术具体操作。3.纯化大肠杆菌以及菌种的保藏 易错提示酒精消毒时,70%的酒精杀菌效果最好,原因是:浓度过高,使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜,乙醇分子不能渗入其中;浓度过低,杀菌力减弱。【例1】回答下列问题。(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数,要想使所得估计值更接近实际值,除应严格操作、多次重复外,还应保证待测样品稀释的。解析:(1)大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点,培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。(2)灭菌是用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,所以对培养基和培养皿进行灭菌;消毒是用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物,操作者的双手需要进行清洗和消毒,紫外线能使蛋白质变性,还能损伤DNA的结构。(3)稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养,应保证样品稀释的比例适合。(4)对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。(5)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生。(6)因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素,并可能导致肠管出现严重症状,使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃,以防止培养物扩散。1.选择合适的培养基培养基种类2.统计菌落数目的方法②操作。【例2】尿素是一种重要的农业肥料,但若不经细菌的分解,就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多,同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用,设计了以下实验,并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示,实验步骤如下图所示。请分析回答问题。KH2PO4(1)此培养基能否用于植物组织培养?,理由是。(4)转为固体培养时,常采用的方法接种,获得单菌落后继续筛选。(6)在进行分离分解尿素的细菌实验时,A同学从培养基上筛选出大约150个菌落,而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有()。(填序号)解析:(1)微生物与植物生长所需的营养不完全相同,培养微生物的培养基不能用于植物组织培养。(5)灭菌要彻底消灭微生物及其芽孢,如①和②。实验操作者的双手要消毒。选目的菌选择(3)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(4)涂布平板法(划线法)(5)①和②③(6)①②③(7)酚红指示剂脲酶1.筛选原理2.实验流程方法优点 易错提示对分离的纤维素分解菌作进一步鉴定的原因【例3】纤维素酶可以通过微生物发酵生产,为了提高纤维素酶的产量,请你设计一个实验,利用诱变育种的方法,获得产生纤维素酶较多的菌株。(2)预期实验结果及结论:①诱变组中菌落周围的透明圈比对照组,说明。维素酶的菌株,先进行诱变处理,由于突变是不定向的,所以要进行筛选。实验分为两组,实验组用诱变剂处理,对照组不作处理。要检测纤维素分解菌产生纤维素酶的能力,应用含纤维素的鉴别培养基,根据形成的透