中药化学生物碱类化学成分的提取分离技术3.5.1必备知识一、概述概述概述指存在于生物体内一类含氮的有机化合物；多数具有碱性且能和酸结合生成盐；大部分为杂环化合物且氮原子在杂环内；多数有较强的生理活性。概述二、结构与分类麻黄枝、茎二、结构与分类二、结构与分类二、结构与分类二、结构与分类二、结构与分类苦参二、结构与分类二、结构与分类二、结构与分类二、结构与分类白花曼陀罗山莨菪二、结构与分类古柯树二、结构与分类喜树二、结构与分类黄连二、结构与分类二、结构与分类二、结构与分类二、结构与分类二、结构与分类二、结构与分类三、理化性质三、理化性质三、理化性质三、理化性质三、理化性质（一）一般性质三、理化性质（一）一般性质三、理化性质（一）一般性质三、理化性质（二）碱性三、理化性质（二）碱性三、理化性质（二）碱性三、理化性质（二）碱性三、理化性质（二）碱性三、理化性质（二）碱性三、理化性质（二）碱性三、理化性质（二）碱性三、理化性质（二）碱性四、生物碱的鉴定（一）沉淀反应1.沉淀试剂硅钨酸(Bertrand试剂)SiO212WO3类白色沉淀苦味酸(Hager试剂)2,4,6-三硝基苯酚黄色沉淀雷氏铵盐(Ammoniumreineckate)硫氰酸铬铵试剂，与季铵型生物碱反应生成红色沉淀或结晶。2.沉淀反应条件（1）通常在酸性水溶液中生物碱成盐状态下进行；（若在碱性条件下则试剂本身将产生沉淀）（2）在稀醇或脂溶性溶液中时，含水量>50%；（当醇含量>50%时可使沉淀溶解）（3）沉淀试剂不易加入多量。（如：过量的碘化汞钾可使产生的沉淀溶解）3.结果的判断（1）鉴别时每种Alk需采用三种以上沉淀试剂；（沉淀试剂对各种Alk的灵敏度不同）（2）直接对中药酸提液进行沉淀反应，则阳性结果，不能判定Alk的存在阴性结果可判断无Alk存在。氨基酸、蛋白质、多糖、鞣质等+沉淀试剂——沉淀（1）矾酸铵-浓硫酸溶液（Mandelin试剂）为1%矾酸铵的浓硫酸溶液。如遇阿托品显红色，可待因显蓝色，士的宁显紫色到红色。（2）钼酸铵-浓硫酸溶液（Frohde试剂）为1%钼酸钠或钼酸铵的浓硫酸溶液，如遇乌头碱显黄棕色，小檗碱显棕绿色，阿托品不显色。（3）甲醛-浓硫酸试剂（Marquis试剂）为30%甲醛溶液0.2ml与10ml浓硫酸的混合溶液。如遇吗啡显橙色至紫色，可待因显红色至黄棕色。1、薄层色谱吸附剂：硅胶、氧化铝展开剂：以苯、氯仿为主显色剂：改良碘化铋钾因硅胶为弱酸性，因此需加碱处理：1）在湿法铺板时加一定量的NaOH溶液，使板呈碱性。2）在中性展开剂中加入一定量的二乙胺或氨水（如氯仿-二乙胺9﹕5或9﹕1）3）在层析槽中放一盛有氨水的小杯。2、纸色谱固定相：水、甲酰胺、酸性缓冲液3、高效液相色谱1.水或酸水提取法原理：①利用生物碱盐易溶于水，难溶或不溶于亲脂性有机溶剂的溶解性能，用水进行提取。②用酸水提取可使生物碱都以盐的形式被提出，提高提取率。常用的酸：0.5％～1％的乙酸、硫酸、盐酸或酒石酸等。提取方法：浸渍法、渗漉法、煎煮法。此方法的缺点是提取液体积大，浓缩困难，水溶性杂质多。3.亲脂性有机溶剂提取法原理：利用游离生物碱易溶于低极性有机溶剂，进行提取。提取方法：冷浸法、加热回流（连续回流）提取法。此方法的特点是①提取前需用碱碱化。②只能提取亲脂性生物碱，亲水性生物碱不被提出。③杂质少，易于进一步纯化。④毒性大，易燃易爆。（二）水溶性生物碱碱的提取二、分离（一）总生物碱的初步分离（二）生物碱单体的分离1、利用生物碱碱性的差异进行分离方法2总生物碱/氯仿溶解││用不同pH缓冲酸溶液依次萃取┌────┬───┴───┬─────┐↓↓↓↓缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液PH值：高─────────────────→低得到的生物碱碱度：强─────────────────→弱2、利用生物碱或生物碱盐溶解度的差异进行分离生物碱以及生物碱盐在不同溶液的溶解度存在明显的差异，可用于分离。如：氧化苦参碱是苦参碱的氮氧化物，极性稍大，不溶于乙醚。而苦参碱溶于乙醚，于两者的氯仿液中加入乙醚，氧化苦参碱即可析出。如：麻黄碱草酸盐在水中的溶解度比伪麻黄碱草酸盐的溶解度小，可以自水溶液中先行析出。某些生物碱特殊功能团（羟基、内酯键和内酰胺键等）能发生可逆性化学反应，导致其溶解性改变，从而与其他成分分离。1）酚性碱的分离2）内酯类和内酰胺类生物碱的分离4、利用色谱法分离1）吸附柱色谱（常用）常用氧化铝或硅胶作为吸附剂，以氯仿、苯等为底剂的溶剂系统作为洗脱剂，其中加少量碱性试剂，可改善分离效果。2）分配柱色谱例如三尖衫酯碱和高三尖衫酯碱的分离。3）高效液相色谱法（HPLC）这是一种现代高效的分离分析方法。常